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| They were separated by SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) and transferred onto a polyvinylidene difluoride membrane which was then blocked with phosphate buffered saline containing 0.1% Tween 20 and 5% skimmed milk. The proteins on the membrane were reacted with a primary antibody (1:1000) (Cell signaling) and then with a horseradish peroxidase-conjugated secondary antibody (1:10000) (Santa Cruz), followed by color development with an ECL western detection reagent (Thermo scientific) to compare the expression level of MAPK (ERK, JNK and p38) with that of β-actin.the reaction was terminated with 0.1 M citrate buffer before absorbance at 405 nm was read in an ELISA reader. |
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scswpiyly: 金幣+15, 翻譯EPI+1, ★★★★★最佳答案, thanks！ 2012-06-15 12:42:21
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| 用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分離它們并轉(zhuǎn)移至氟乙烯膜，然后用含0.1%吐溫和5%脫脂奶的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行阻塞。膜上的蛋白質(zhì)與一級(jí)抗體(1:1000) 進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)（細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)），然后與辣根過(guò)氧化物酶共軛二級(jí)抗體 (1:10000) (Santa Cruz)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，再用ECL免疫印跡檢測(cè)試劑（也叫ecl敏發(fā)光液）(Thermo scientific)顯色比較絲裂原活化蛋白激酶(ERK, JNK and p38)與β-actin的表達(dá)水平。在用酶標(biāo)儀在405nm處讀取吸光度前，以0.1M檸檬酸鹽緩沖液終止反應(yīng)。 |
3樓2012-06-15 10:34:07
古可ぷ
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sltmac: 金幣+1 2012-06-15 12:36:02
sltmac: 金幣+1 2012-06-15 12:36:02
| 用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳分離它們并轉(zhuǎn)移至氟乙烯膜，然后用含0.1%吐溫和5%脫脂奶的磷酸鹽緩沖液阻塞。膜上的蛋白質(zhì)與一級(jí)抗體(1:1000) 起化學(xué)反應(yīng)（細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)），然后與辣根過(guò)氧化物酶共軛二級(jí)抗體 (1:10000) (Santa Cruz), 起化學(xué)反應(yīng)，再用ECL免疫印跡檢測(cè)試劑（也叫ecl敏發(fā)光液）(Thermo scientific)顯色比較絲裂原活化蛋白激酶(ERK, JNK and p38)與β-actin的表達(dá)水平。用酶標(biāo)儀在405nm處讀取吸光度前，用0.1M檸檬酸鹽緩沖液終止反應(yīng)。 |
2樓2012-06-15 10:31:40
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