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pabnei_2003新蟲 (初入文壇)
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[求助]
生物制品病毒滅活有人做過嗎
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生物制品病毒滅活有人做過嗎？ 如果做得話怎么做啊？需要做幾個病毒就可以了？ |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
癡夷子皮: 金幣+5, 謝謝提供，歡迎常來哦。 2012-06-20 12:51:36
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關(guān)于印發(fā)《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》的通知 國藥監(jiān)注 [2002]160號 各省、自治區(qū)、直轄市藥品監(jiān)督管理局： 為防止肝炎、艾滋病等血源性傳播疾病隨血液制品的應(yīng)用而傳播，保證臨床使用安全，我局組織有關(guān)單位和專家制定了《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》，現(xiàn)予印發(fā)，請遵照執(zhí)行并轉(zhuǎn)發(fā)至轄區(qū)內(nèi)各有關(guān)單位。 國家藥品監(jiān)督管理局 二○○二年五月九日 血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則 目前已知經(jīng)血液制品傳染的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV和細(xì)小病毒B19。尚未發(fā)現(xiàn)經(jīng)血液制品傳染CJD。但有少數(shù)研究報告發(fā)現(xiàn)有實驗性傳染現(xiàn)象，因此要密切關(guān)注CJD，特別是vCJD的發(fā)展動向。 為了提高血液制品安全性，生產(chǎn)工藝要具有一定的去除/滅活部分病毒能力，生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的去除/滅活病毒方法。本技術(shù)指導(dǎo)原則是對血液制品（指以人血漿為原料制備的制品）生產(chǎn)過程以及特定的去除/滅活病毒方法驗證的指導(dǎo)原則，包括指示病毒和病毒去除/滅活方法的選擇、驗證方案的設(shè)計、結(jié)果判定以及附錄所列技術(shù)驗證申報的程序。 一、去除/滅活病毒方法的選擇 由于不同類血液制品潛在的污染病毒的可能性不同，為此選擇病毒去除/滅活方法的側(cè)重點也應(yīng)有所不同： （一）凝血因子類制品 生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的能去除/滅活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一種或多種方法聯(lián)合去除/滅活病毒。 （二）免疫球蛋白類制品 對于免疫球蛋白類制品（包括靜脈注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特異性人免疫球蛋白）生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的滅活脂包膜病毒方法。但從進(jìn)一步提高這類制品安全性考慮，提倡生產(chǎn)過程中加入特定的針對非脂包膜病毒的去除/滅活方法。 （三）白蛋白 采用低溫乙醇生產(chǎn)工藝和特定的去除/滅活病毒方法，如巴斯德消毒法等。 二、常用的去除/滅活病毒方法評價 （一）巴斯德消毒法（巴氏消毒法） 1．人血白蛋白制品 幾十年臨床應(yīng)用結(jié)果表明，白蛋白的巴氏消毒法對HIV和肝炎病毒是安全的。其病毒滅活條件已很完善，可不要求進(jìn)行病毒滅活驗證。但是必須對巴氏消毒法所用設(shè)施進(jìn)行驗證，使巴氏消毒各參數(shù)符合要求（包括制品內(nèi)溫度分布的均一性和滅活時間）。 2．其它血液制品（液體制劑） 由于制品的組成、穩(wěn)定劑（如：氨基酸、糖、枸櫞酸鹽等）及其濃度的不同，均會對滅活病毒效果有一定的影響。因此在采用巴氏消毒滅活病毒方法時必須進(jìn)行病毒滅活效果驗證。 （二）干熱法（凍干制品） 80℃加熱72小時，可以滅活HBV、HCV、HIV和HAV等病毒。但應(yīng)考慮制品的水分含量、制品組成（如：蛋白質(zhì)、糖、鹽和氨基酸）對病毒滅活效果的影響。應(yīng)確定允許的制品瓶間各參數(shù)的差異。病毒滅活用的干熱箱至少每半年驗證一次。驗證時干燥箱內(nèi)應(yīng)設(shè)多個測溫點（包括制品內(nèi)、箱內(nèi)最高和最低溫度點）。 （三）有機溶劑/去污劑（S/D）處理法 有機溶劑，如：磷酸三丁脂（TNBP）和非離子化的去污劑，如：Triton X-100或吐溫-80結(jié)合可以滅活脂包膜病毒，但對非脂包膜病毒無效。常用的滅活條件是0.3%TNBP和1%吐溫-80，在24℃處理至少6小時；0.3%TNBP和1%Triton X-100，在24℃處理至少4小時。S/D處理前應(yīng)先用1μm濾器除去蛋白溶液中可能存在的顆粒（顆�？赡懿啬洳《緩亩绊懖《緶缁钚Ч�。加入S/D后應(yīng)確保是均一的混合物。在滅活病毒全過程中應(yīng)將溫度控制在規(guī)定的范圍內(nèi)。如果在加入S/D后過濾，則須檢測過濾后S/D的濃度是否發(fā)生變化，如有變化應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。吐溫-80應(yīng)采用植物源性，并應(yīng)采用稱量法量取。 （四）膜過濾法 膜過濾技術(shù)只有在濾膜的孔徑比病毒有效直徑小時才能有效除去病毒。該方法不能單獨使用，應(yīng)與其它方法聯(lián)合使用。 驗證研究時應(yīng)考慮蛋白溶液的濃度、濾速、壓力和過濾量等重要參數(shù)。在過濾前及過濾后應(yīng)測試濾膜的完整性。 （五）低pH孵放法 研究表明，免疫球蛋白生產(chǎn)工藝中的低pH（如pH4）處理（有時加胃酶）能滅活幾種脂包膜病毒。滅活條件（如：pH值、孵放時間和溫度、胃酶含量、蛋白質(zhì)濃度、溶質(zhì) 含量等因素）可能影響病毒滅活效果，驗證試驗應(yīng)該研究這些參數(shù)允許變化的幅度。 三、特定的去除/滅活病毒方法驗證 （一）指示病毒的選擇 首先，應(yīng)該選擇經(jīng)血液傳播的相關(guān)病毒（如：HIV），不能用相關(guān)病毒的，要選擇與其理化性質(zhì)盡可能相似的指示病毒；第二，所選擇的病毒理化性質(zhì)應(yīng)有代表性（病毒大小、核酸類型以及有無包膜），其中至少應(yīng)包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。在進(jìn)行去除/滅活病毒驗證時，應(yīng)根據(jù)制品的特性及所采用的病毒去除/滅活工藝，參照下表列舉的病毒選擇適宜的指示病毒。所選擇的指示病毒至少應(yīng)包括HIV-1、HBV和HCV模擬病毒以及非脂包膜病毒。水皰性口炎病毒（VSV）耐受的pH范圍比較廣，驗證低pH孵放法滅活病毒效果時可選用此指示病毒。 經(jīng)血液傳播疾病的相關(guān)病毒及驗證可選用的指示病毒（舉例） ┌──┬───┬───┬──────┬─────────────┐ │病毒│基因組│脂包膜│大�。╪m） │ 指示病毒舉例 │ ├──┼───┼───┼──────┼─────────────┤ │HIV │ RNA │ 有 │ 80-100 │ HIV │ ├──┼───┼───┼──────┼─────────────┤ │HBV │ DNA │ 有 │ 45 │鴨乙型肝炎病毒、偽狂犬病毒│ ├──┼───┼───┼──────┼─────────────┤ │HCV │ RNA │ 有 │ 40-60 │牛腹瀉病毒、Sindbis病毒 │ ├──┼───┼───┼──────┼─────────────┤ │HAV │ RNA │ 無 │ 27 │HAV、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腦心肌│ │ │ │ │ │炎（EMC）病毒 │ ├──┼───┼───┼──────┼─────────────┤ │B19 │ DNA │ 無 │ 20 │犬細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒 │ └──┴───┴───┴──────┴─────────────┘ （二）方案設(shè)計 1．去除/滅活病毒驗證研究應(yīng)符合GLP的要求。 2．研究影響去除/滅活病毒效果的參數(shù)（包括機械參數(shù)和理化參數(shù)）允許變化的幅度。 3．研究病毒滅活動力學(xué)，包括病毒滅活速率和滅活曲線。 4．指示病毒滴度應(yīng)該盡可能高（病毒滴度應(yīng)≥106/ml）。 5．加入的病毒與待驗證樣品體積比不能高于1∶9。 6．如可能，驗證過程中每步取出的樣品應(yīng)盡快直接進(jìn)行病毒滴定，不做進(jìn)一步處理（如超離心、透析或保存、除去抑制劑或毒性物質(zhì)等）。如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時間取出的樣品要在同一時間進(jìn)行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響。 7．檢測方法可包括蝕斑形成、細(xì)胞病變（如合胞體或病灶形成）、終點滴定或其他方法。這些方法應(yīng)該有適宜的靈敏度和可重復(fù)性，每一個取樣點應(yīng)取雙份樣品并設(shè)有對照以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 8．如果制品的生產(chǎn)工藝中包含了兩步或兩步以上病毒去除/滅活方法，應(yīng)該分別進(jìn)行病毒滅活效果驗證。 （三）觀察指標(biāo) 1．病毒方面 （1）去除/滅活病毒滴度； （2）滅活病毒速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報告驗證結(jié)果。 2．病毒去除/滅活各參數(shù)允許變化范圍 3．蛋白質(zhì)方面 （1）制品質(zhì)量應(yīng)符合《中國生物制品規(guī)程》或有關(guān)規(guī)定； （2）采用適當(dāng)方法測定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能活性的變化。如：制品比活性、IVIG的Fc功能分析可了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生了變化；凝膠色譜法可檢測蛋白質(zhì)分子大小和形狀的變化；蛋白質(zhì)形狀變化可導(dǎo)致擴(kuò)散系數(shù)、沉降常數(shù)和粘度的改變；SDS-PAGE，特別是等電聚焦和PAGE結(jié)合（雙向電泳）也是檢測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的很好方法。 （3）如果采用新的去除/滅活方法（包括更換使用已認(rèn)可的病毒滅活方法或國內(nèi)外未曾采用過的病毒去除/滅活方法），需對蛋白質(zhì)半衰期和新免疫原性進(jìn)行研究。要求如下： 半衰期：用適宜動物（如大鼠或家兔）和未經(jīng)病毒去除/滅活的相同制品進(jìn)行半衰期比較； 新免疫原性：新免疫原性用來檢查蛋白質(zhì)較高級別結(jié)構(gòu)上的變化。這些變化不一定 損害蛋白質(zhì)功能，但是會引起受體免疫反應(yīng)。實驗室檢測新免疫原性是非常困難的。可用經(jīng)和未經(jīng)病毒滅活的蛋白分別免疫動物（如家兔），所產(chǎn)生的抗體交叉用未經(jīng)和經(jīng)病毒滅活的蛋白結(jié)合。如果經(jīng)病毒滅活的蛋白抗體被未經(jīng)病毒滅活的蛋白完全結(jié)合，說明不含新抗原。由于不能保證人類免疫系統(tǒng)識別的表位與實驗動物相同，因此推薦在Ⅳ期臨床（獲得生產(chǎn)文號后）開展是否有新抗原產(chǎn)生的研究。 （四）效果的判定 判斷病毒去除/滅活的有效性須綜合考慮，不能僅以病毒去除/滅活的量來確定。在確定有效之前，必須考慮如下因素，審慎評價每次驗證結(jié)果。 1．驗證試驗所選擇的病毒是否適宜，病毒驗證的設(shè)計是否合理。 2．病毒降低量（log10）≥4logs，表示該步驟去除/滅活病毒有效。如因檢測方法造成病毒降低量＜4logs時，應(yīng)盲傳三代，如無病毒檢出，可認(rèn)定是有效的滅活病毒方法。 3．病毒滅活動力學(xué)可更好的顯示病毒滅活的效果。病毒滅活通常不是簡單的一級反應(yīng)。往往是起始反應(yīng)速率快，其后變慢。如果病毒滅活速率隨時間明顯降低，表示該方法可能無效，或者殘留的指示病毒對該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。 4．病毒實際滴度為基礎(chǔ)病毒，指示病毒與樣品1:9的比例混勻后零點取樣的病毒滴度，通過與經(jīng)去除/滅活病毒后的測定的實際病毒殘留量的比較，作為該病毒去除/滅活方法（步驟）實際的滅活病毒的量。 5．病毒檢測敏感度的限值。 舉例說明： （1）加入6logs 病毒，剩余4logs 病毒，可將去除/滅活病毒的log數(shù)計算在生產(chǎn)全過程中去除/滅活病毒總量之中，但是就此步（方法）去除/滅活病毒能力而言是無效的。 （2）加入6logs 病毒，但由于制品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測靈敏度限值為4logs ，僅證明除去2logs 的病毒。在此種情況下需改變試驗設(shè)計重新進(jìn)行驗證。 （3）加入6logs 病毒，但仍可測定2logs 的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)出，并不受工藝的影響，應(yīng)認(rèn)為是有效的去除/滅活病毒的方法。 （4）加入 6logs病毒 ，之后未檢測出病毒。但是由于檢測靈敏度限值為2logs ，僅能認(rèn)為大約清除或滅活了4logs 病毒。事實上可能等于或大于4logs ，因此應(yīng)判定此方法清除的病毒量≥4logs。 （5）病毒滅活動力學(xué)是非常重要的觀察指標(biāo)。如巴氏消毒法（60℃，10小時），如果病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，說明此方法滅活病毒效果很好。如果病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時才達(dá)到最低檢出限度值，不能認(rèn)為是一個有效的病毒滅活方法。這就是說，評價驗證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時也要考慮病毒滅活動力學(xué)。 四、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力的驗證 生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力驗證參照特定的去除/滅活病毒方法驗證的要求進(jìn)行。需要特殊考慮的問題有以下幾方面： （一）只對可能有去除/滅活病毒作用的生產(chǎn)步驟進(jìn)行驗證。 （二）模擬的生產(chǎn)工藝各種參數(shù)應(yīng)盡可能與實際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、蛋白質(zhì)和其他組成成分的濃度、反應(yīng)時間、層析柱的柱床高度及流速與床高的比例、洗脫圖譜及該步驟的生產(chǎn)效果（如產(chǎn)量、比活性、組成成分）。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒去除/滅活效果的影響。 （三）生產(chǎn)各步驟對不同類型病毒去除/滅活的選擇性。 （四）核酸擴(kuò)增技術(shù)（如PCR）檢測病毒核酸的靈敏度比較高，但是該檢測技術(shù)最大的局限性是不能區(qū)別被滅活了還是未被滅活的病毒。因此該技術(shù)不能用于滅活病毒量的驗證，只能用于生產(chǎn)過程中病毒去除量的驗證。 （五）通常在生產(chǎn)過程中去除/滅活病毒量是可以計算在清除病毒總量中，但不能認(rèn)定是有效病毒去除步驟。因為生產(chǎn)過程通常有一些變化，很難控制及驗證，而且，病毒分配完全取決于病毒特異的理化性質(zhì)，這些理化性質(zhì)影響了病毒與凝膠介質(zhì)相互作用和沉淀的性質(zhì)。因此由于病毒表面特性的微小差異（如：糖基化），指示病毒與靶病毒分配形式可能完全不同。在實驗室增殖的相關(guān)病毒可能在分配上與野生株不同。然而，如果病毒降低量可重復(fù)，如果影響病毒分配的各生產(chǎn)參數(shù)可以適當(dāng)?shù)卮_定和控制，所要的組份能可靠的與一般公認(rèn)的含病毒組份分開，就可以符合有效步驟的標(biāo)準(zhǔn)（即，認(rèn)為是有效去除/滅活病毒步驟）。 （六）驗證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，獲得生產(chǎn)全過程中估計去除/滅活病毒的總量。一般降低的總量是各步降低病毒量的總和。但是由于病毒驗證的局限性，如分步驟中病毒降低量≤1 log則不應(yīng)將其計算在總量中。 五、去除/滅活病毒方法的再驗證 以下幾種情況需進(jìn)行病毒去除/滅活方法的再驗證： （一）首次生產(chǎn)者，需對生產(chǎn)工藝中特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)行再驗證 （二）采用新工藝或?qū)υ猩a(chǎn)工藝進(jìn)行了重大改革時，需對生產(chǎn)工藝進(jìn)行清除病毒能力驗證；對特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)行去除/滅活病毒效果驗 （三）工藝改變但不屬重大工藝改革時，需對特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)行再驗證； （四）被滅活的中間品組成成分或pH值發(fā)生改變時，需對特定的去除/滅活病毒方法進(jìn)行再驗證。 附錄： 血液制品病毒去除/滅活驗證申報程序 1、國家藥品監(jiān)督管理局授權(quán)中國藥品生物制品檢定所及其它認(rèn)定的檢測實驗室進(jìn)行病毒去除/滅活效果的驗證工作。 2、血液制品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按本技術(shù)指導(dǎo)原則的要求對其生產(chǎn)工藝和特定的病毒去除/滅活方法進(jìn)行驗證。如無條件，可委托其它單位進(jìn)行去除/滅活病毒效果的驗證。 3、血液制品生產(chǎn)企業(yè)在完成去除/滅活病毒效果驗證后，向中國藥品生物制品檢定所提出驗證申請，并附制品生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、病毒滅活方法及其標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）、至少中試規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)的三批病毒滅活前中間品（去除/滅活病毒前的樣品）及其制造記錄等相關(guān)資料。 4、中國藥品生物制品檢定所對生產(chǎn)單位提交的驗證申請及相關(guān)的技術(shù)資料進(jìn)行審核；對其提供的三批病毒滅活前的中間品進(jìn)行與病毒去除/滅活方法相關(guān)的參數(shù)（如：pH、蛋白質(zhì)濃度、水分及穩(wěn)定劑含量、純度等）的檢測。 5、中國藥品生物制品檢定所及授權(quán)認(rèn)定的檢測實驗室對生產(chǎn)單位提交的連續(xù)生產(chǎn)的三批病毒滅活前的中間品進(jìn)行病毒滅活方法效果驗證。授權(quán)認(rèn)定的檢測實驗室在驗證完成后將驗證結(jié)果函告中國藥品生物制品檢定所。 6、在病毒去除/滅活驗證的同時或驗證后，中國藥品生物制品檢定所對申報單位提供的連續(xù)生產(chǎn)的三批制品（批號可與病毒驗證時報送的制品的批號不同，但必須是采用相同的生產(chǎn)工藝和病毒去除/滅活方法生產(chǎn)的制品）進(jìn)行全面質(zhì)量復(fù)核（按《中國生物 制品規(guī)程》及有關(guān)的法定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，出具檢驗報告）。 7、采用新的病毒去除/滅活方法時，在資料審查及病毒滅活效果驗證結(jié)束后，由中國藥品生物制品檢定所負(fù)責(zé)組織血液制品和病毒學(xué)等方面專家以及包括藥品審評中心在內(nèi)的相關(guān)部門的人員參加的技術(shù)論證會，對申報的病毒滅活方法進(jìn)行論證。 8、驗證結(jié)束后，中國藥品生物制品檢定所將去除/滅活病毒驗證結(jié)果、綜合評價意見及三批制品檢定報告回復(fù)申報單位； 9、申報單位將申報血液制品擬采用的病毒去除/滅活方法研究資料（包括相關(guān)文獻(xiàn)）、企業(yè)自檢報告和中國藥品生物制品檢定所及授權(quán)認(rèn)定的檢測實驗室向生產(chǎn)單位提交的病毒去除/滅活方法驗證結(jié)果、綜合評價或論證意見、加入病毒去除/滅活工藝后的制品穩(wěn)定性考核結(jié)果、中國藥品生物制品檢定所出具的三批制品檢定報告等一并上報國家藥品監(jiān)督管理局予以審批。 |
2樓2012-06-20 12:08:20
無厘頭刺猬
新蟲 (初入文壇)
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3樓2014-10-30 13:54:46
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[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
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[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂29 2026-03-18 | 5/250 |
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[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
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[考研] 一志愿西安交通大學(xué) 學(xué)碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
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[論文投稿]
申請回稿延期一個月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
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wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
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[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
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[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
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