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喵汪銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助：western blotting一抗有關(guān)問題
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做western blot時(shí)要先用一抗，再用HRP標(biāo)記的二抗， 為什么不能直接用HRP標(biāo)記的一抗呢？ 還有，我試過了，先用金標(biāo)一抗，再用HRP標(biāo)記的二抗也做不出來，為什么一抗改成金標(biāo)一抗就不行了呢？ |
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喵汪
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2樓2012-06-21 18:26:14
3樓2012-06-22 09:13:32
4樓2012-06-22 09:20:22
喵汪
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5樓2012-06-22 21:06:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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6樓2012-06-23 05:42:02
mlanqiang
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8樓2012-06-23 06:36:32
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【答案】應(yīng)助回帖
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不是不能直接用HRP標(biāo)記一抗，如果要這么做，是完全可以的。 WB本身就分直接法，間接法等，所謂直接法就是直接標(biāo)記一抗，但實(shí)踐中更多采用標(biāo)記二抗的間接法。 之所以，一般都采用標(biāo)記二抗的方法，原因有兩個(gè)： 1，若果你的一抗種類比較多，那就得一個(gè)一個(gè)地標(biāo)記，很麻煩不是？ 2，直接標(biāo)記一抗，只能結(jié)合少量標(biāo)記物，而標(biāo)記二抗以后，一抗可以結(jié)合不止一個(gè)二抗分子，所以可以通過二抗來增強(qiáng)信號(hào)，使WB結(jié)果更清晰。 |
9樓2012-06-23 10:46:33
喵汪
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10樓2012-06-23 13:53:26
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