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wangwu0628金蟲 (初入文壇)
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[求助]
蘭科花粉離體萌發(fā)
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最近一直在做蝦脊蘭的花粉管萌發(fā)的實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)基主要成分是蔗糖和硼酸，設(shè)置了好幾個(gè)濃度梯度，10%，15%，20%蔗糖；0.001%，0.002%，0.003%硼酸；0.001%，0.002%，0.003%氯化鈣，0.7%瓊脂。溫度保持在25℃。分別在培養(yǎng)12個(gè)小時(shí)和24個(gè)小時(shí)后鏡檢均為看到花粉管萌發(fā)。不知道哪里除了問(wèn)題？找高手請(qǐng)教下： 1.培養(yǎng)基配方是否可以需要調(diào)整？ 2.是否需要調(diào)PH？一般是維持在5.8-6.5嗎？ 3.培養(yǎng)時(shí)間是長(zhǎng)了還是短了？ 4.蘭花為花粉塊，采用什么方法將其弄散最好？我一直是輕敲花粉塊感覺(jué)不是很理想。 |
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花粉不萌發(fā)，最主要的原因是沒(méi)有調(diào)pH值。用MES的緩沖體系，具體pH需參照前人的研究。 先配置除瓊脂之外的培養(yǎng)基成分，將蘭花花粉塊放入，振蕩使之均勻散開(kāi)。然后將含花粉的這種培養(yǎng)基與1.4%的瓊脂等體積混合，之后用槍頭吸取溶液加到培養(yǎng)容器中。待瓊脂凝膠后，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)即可。 |
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wangwu06282樓2012-06-22 22:28:01
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3樓2012-06-22 22:33:57
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瓊脂的最低凝結(jié)濃度是0.7%，再低了就不能形成固體凝膠。瓊脂有顏色，如果你要鏡檢計(jì)數(shù)，建議還是換成瓊脂糖，這個(gè)形成的凝膠是無(wú)色的，看共聚焦顯微鏡都沒(méi)問(wèn)題。 同屬蘭科，別的文獻(xiàn)上的配方對(duì)你的這個(gè)種應(yīng)該同樣適用。我以前培養(yǎng)百合花粉的培養(yǎng)基在松科植物的花粉上同樣work。 百合的formula大致如下： 硼酸0.01%， CaCl2或Ca(NO3)2 0.03%，10mM MES（0.19525%），其它成分省略未寫。 KOH調(diào)節(jié)pH，具體值需參照文獻(xiàn)，不同植物會(huì)不一樣。10mM MES應(yīng)該也適用于蘭花花粉。 1.4%/2=0.7%，等體積混合的終濃度不就是0.7%？ |
8樓2012-06-23 17:32:21
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4樓2012-06-23 08:57:09
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問(wèn)題主要可能出現(xiàn)在以下幾方面： 1、時(shí)間太久，多數(shù)花粉在適宜條件下，0.5-5小時(shí)就能萌發(fā) 2、花粉本身失去了活性，你怎么做都是白搭 3、瓊脂略高，且沒(méi)有保濕培養(yǎng)，花粉萌發(fā)過(guò)程中的濕度保持很重要 以上幾點(diǎn)中，我覺(jué)得花粉的問(wèn)題可能是關(guān)鍵，好好看一下別人是怎么收集保存花粉的，對(duì)你會(huì)有幫助 |
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5樓2012-06-23 09:03:00
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6樓2012-06-23 09:03:03
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7樓2012-06-23 09:06:19
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9樓2012-06-23 17:35:44
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10樓2012-06-23 17:45:44
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