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Marado金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
Dreamer
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[求助]
連接頻頻出問(wèn)題，有沒(méi)有高人指點(diǎn)一下 已有2人參與
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本人要連一段1926bp的片段到T載體pMD19-T（2692bp）上面，按理說(shuō)不算大片段吧，可是連接老連不上去，第一次連的時(shí)候考慮到目的片段回收后濃度不大，所以加大了模板的量，做了模板：T載體，5:1,7:1,10:1三個(gè)梯度，菌倒是長(zhǎng)了不少，挑了5個(gè)單菌落，驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)都沒(méi)有連上 昨天第二次連接，做了兩種體系，連接體系如下： 體系一 模板：2ul T載體：0.5ul solution I：3.5ul 體系二 模板：2.5ul T載體：0.5ul solution I：3.5ul 連接時(shí)間10h，涂氨芐平板過(guò)夜 今天一看平板發(fā)現(xiàn)就體系一兩個(gè)平板長(zhǎng)了，加起來(lái)才三個(gè)菌落 還說(shuō)不準(zhǔn)三個(gè)都是陽(yáng)性克隆 挑出來(lái)了，準(zhǔn)備明早驗(yàn)證了.有誰(shuí)推薦個(gè)體系麼，膠回收后點(diǎn)了5ul的模板跑了下看，感覺(jué)濃度還成，之前濃度更低都連得上，氨芐平板沒(méi)問(wèn)題的，新配的，濃度也沒(méi)問(wèn)題的，100ug/ml的終濃度，培養(yǎng)基冷卻到50℃的時(shí)候才加進(jìn)去的. |
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- 【求助/交流】pMD-18T載體連接出現(xiàn)了問(wèn)題，請(qǐng)各位高手指點(diǎn)�。�！
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銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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4樓2012-10-26 16:05:09
jiuzi59
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2樓2012-07-08 04:47:02
Marado
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3樓2012-07-08 09:24:53
fuchange918
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5樓2014-07-06 09:50:40
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