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[交流]
PCR總的延伸目的
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大家好！想請教個問題，PCR中總的延伸目應(yīng)該是充分使單鏈擴增完整吧，但是有一點不太明白，如果在循環(huán)過程中，單鏈擴增的不夠長，那么另一端引物的結(jié)合區(qū)應(yīng)該也會缺失，這樣擴增也無法進行下去，但事實并不是這樣。 想聽聽大家對總的延伸的目的的理解，謝謝！ |
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2樓2012-07-16 22:44:24
★ ★ ★ ★ ★
cpshang(金幣+1): 謝謝參與
cpshang: 金幣+4, 非常感謝！原來如此�。�！ 2012-07-17 17:18:56
cpshang(金幣+1): 謝謝參與
cpshang: 金幣+4, 非常感謝！原來如此�。�！ 2012-07-17 17:18:56
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elongation的目的 你是對的 對于時間不足的elongation 1、如果每個循環(huán)的時間一樣（都不足）——那么最終的PCR產(chǎn)物都是5’端或3’端片段缺失的短片段（短于模板） 原因是：盡管沒有擴增完全 但這些短片產(chǎn)物還是可以與某一種primer（各自對應(yīng)5’端和3’端）結(jié)合 而在下一循環(huán)里繼續(xù)用于擴增 2、只有某一個循環(huán)的elongation時間不足——最后的產(chǎn)物中既有與模板幾乎相同的完整DNA 也有缺失某端序列的短DNA片段 （為了方便 我把這兩種分別稱為大片段和小片段） 這是由于小片段仍然能夠在下一循環(huán)中與自己對應(yīng)的primer結(jié)合并進行擴增 （跟情況1相同） 但是還有另外一種狀況就是 小片段在進入新的循環(huán)之后 也可能和大片段（完整片段）結(jié)合 那么這種狀況下 小片段會被補完 變成大片段——而對于整個PCR實驗來說 因為大片段并沒有全部與primer結(jié)合 所以 總產(chǎn)物的量會低于預(yù)期（具體低多少是要看這個短循環(huán)的是第幾次循環(huán) 以及它后面循環(huán)的次數(shù) |
3樓2012-07-17 09:19:21
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