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wallace13145新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助我反轉(zhuǎn)錄跑膠結(jié)果
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請問大家我檢測反轉(zhuǎn)錄成功與否為什么目的條帶下還有個(gè)微弱的條帶？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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3樓2012-07-18 20:33:06
2樓2012-07-18 20:05:27
西瓜
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【答案】應(yīng)助回帖
mengfei8336: MolEPI+1, 多謝關(guān)注。 2012-07-18 21:13:12
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mRNA各種大小都有，cDNA也是一樣的。 反轉(zhuǎn)錄一般有三種引物： 1.Oligo dT可以結(jié)合mRNA的多聚A尾巴，用來反轉(zhuǎn)錄所有mRNA； 2.隨機(jī)引物，可結(jié)合到各種RNA上，可以反轉(zhuǎn)錄幾乎所有的RNA。 上述兩種引物的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物包含各種大小的片段，而且濃度都不會(huì)太高（跟PCR產(chǎn)物沒得比的哈），所以跑膠的話是彌散整個(gè)泳道的淡淡一片。 3.基因特異的引物，原理類似PCR引物，只反轉(zhuǎn)錄特定的片段，這種反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物量就更少了，跑膠的話幾乎是看不到東西的。 |
4樓2012-07-18 21:08:10
xw19880905
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5樓2012-07-19 11:37:20
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