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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » co-IP 條帶問題
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[交流]
co-IP 條帶問題
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我做co-IP Input IgG 抗目的蛋白 三條泳道均出現條帶 拿了師姐的一組已知相互作用的蛋白來做也是這種情況 不知道哪里出了問題 希望做過的交流討論一下 |
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a）293ET細胞共轉染質粒后培養(yǎng)24h，棄掉培養(yǎng)基，PBS洗3遍，用1mL組織裂解緩沖液(PMSF+cocktail)裂解，冰上30min－2h，4℃，12000g離心20min，收集上清液。 b) 預留50μl做input，其余樣品加入20μl的proteinG beads預沉淀以除去非特異性吸附的影響，4℃離心2500rpm，3min上清移入新EP管中，平均分為兩份，一份加入4微升目的蛋白抗體，一份加入對應的IgG做為對照，4℃搖過夜。 d）加入40μl的proteinG beads，繼續(xù)搖3h，離心去掉上清。用冷裂解液洗5次，每次2500rpm離心棄上清。 e) 將剩余的裂解液盡量洗干凈，加入2×蛋白上樣緩沖液，煮沸5min，離心 準備上樣。 裂解液 10mM EDTA 10mM EGTA 25mM Tris 1% NP40 |
2樓2012-07-19 14:00:27
3樓2012-07-20 12:28:58
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9樓2012-07-27 13:25:40
10樓2015-06-18 11:39:30
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
| 恩，樓主這個是用目的蛋白抗體去吊目的蛋白的吧，這個應該算是IP不算是CO-IP。恩。。CO-IP應該是誘餌蛋白和目的蛋白結合，再用誘餌蛋白的抗體去吊誘餌蛋白。具體的，樓主可以自行到“IP與CO-IP區(qū)別”這個網頁看看。 |
11樓2018-05-04 09:45:48
簡單回復
yxu19867樓
2012-07-22 16:48
回復
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