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明辨是非銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩個(gè)ORF之間一定要有一段ployA序列才能都表達(dá)嗎？
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構(gòu)建一個(gè)表達(dá)載體序列為 CMV啟動(dòng)子－海腎熒光素的ORF－豬瘟5'UTR－螢火蟲熒光素ORF 但是在熒光監(jiān)測的時(shí)候只測到了海腎的熒光 后者沒有表達(dá) 海腎的ORF最后的終止密碼子去掉了 ORF跟豬瘟5'UTR之前序列為 GTCGACTAATACGACTCACTATA是構(gòu)建需要加上的 不知道有沒有什么特別的作用 blast搜索也沒有什么有用的結(jié)果 還有測序結(jié)果顯示海腎ORF將近結(jié)束的位置有一個(gè)堿基缺失 不過這在1000bp的位置已經(jīng)測不準(zhǔn)了 而且測到了海腎的熒光 若果真的有堿基缺失 那么會(huì)一直向后讀大約30個(gè)堿基直到一個(gè)終止子 并且此終止子位于豬瘟5‘UTR里 想知道是我構(gòu)建的方式有問題 還是豬瘟5'UTR本身的啟動(dòng)效率低 還是海腎的ORF有堿基缺失造成移碼所致 謝謝高手了 |
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