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qingtingzhe銀蟲 (正式寫手)
步行者
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[求助]
質(zhì)粒pETDuet-1的提取
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各位分子克隆高手： 我現(xiàn)在雙基因共表達(dá)，pETDuet-1質(zhì)粒很難提，連第一個(gè)基因的時(shí)候，提的濃度很低，但勉強(qiáng)可以用。但連完第一個(gè)基因后，再提取質(zhì)粒每次都是失敗。經(jīng)過pCR驗(yàn)證里面是有那個(gè)質(zhì)粒，但就是提不出來。我的條件如此：接種至有amp的LB培養(yǎng)基，過夜，菌液至渾濁，再加氯霉素四五個(gè)小時(shí)培養(yǎng)，增加拷貝數(shù)。加氯霉素前和氯霉素后的菌液中均提不出質(zhì)粒。我試過分子克隆中的質(zhì)粒中提和試劑盒的小量制備，效果均不好。下圖中最最左面的三條帶為我提取的pACYCDuet-1，最右面的兩條帶為我提取的pETDuet-1質(zhì)粒。兩個(gè)質(zhì)粒同時(shí)提取的，為什么pETDuet-1在帶有一個(gè)基因提不出來了？ 希望大家提出寶貴的建議！ |
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2樓2012-07-21 19:07:58
qingtingzhe
銀蟲 (正式寫手)
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