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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
DH5a感受態(tài)細(xì)胞制備問題
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大家好！我是第一次制備DH5a感受態(tài)，為了克隆測序使用。因為我們實驗室之前沒有人做過，所以在制備過程中出現(xiàn)了問題，想向大家請教。 我是從生工買回的大腸桿菌DH5a菌株，放于－20度保存。我先配制了LB固體和液體培養(yǎng)基，高壓滅菌20min。滅菌結(jié)束立即將LB固體培養(yǎng)基倒入平板內(nèi)，待其凝固后，用滅菌牙簽將DH5a菌株接種到平板上（分區(qū)劃線），然后置于37度烘箱過夜培養(yǎng)，約24小時，取出，發(fā)現(xiàn)已長出菌落。然后在用滅菌牙簽挑取DH5a單菌落于5ml液體培養(yǎng)基（50ml的三角瓶裝）中，然后置于搖床上培養(yǎng)過夜，37度，200rpm，約12小時后，取出，發(fā)現(xiàn)菌液出現(xiàn)明顯的渾濁。然后，我用移液槍吸取菌液1ml放入100ml的液體LB培養(yǎng)基（250ml三角瓶裝），然后放入搖床（37度，200rpm），3小時左右，取出一瓶測其OD600值，發(fā)現(xiàn)只有0.05左右，延長搖床培養(yǎng)時間，甚至到24小時~48小時，取出測OD600，OD600值也只是達(dá)到1點幾，怎么也不會達(dá)到0.5。關(guān)于接種的整個過程都是在超凈工作臺上進(jìn)行的，不知道出現(xiàn)這樣的結(jié)果是什么問題。我已經(jīng)作了很多次嘗試，每次都是OD600達(dá)不到要求。 遇到這個問題，我真的很著急，因為等著克隆測序，所以想請大家?guī)兔χ更c迷津！感激不盡！�。� |
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4樓2012-07-22 09:57:33
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