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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 色譜質譜 » HPLC出峰問題
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xinji銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
HPLC出峰問題
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| 液相色譜C18色譜柱壓力為5MPa，并且出峰時間延遲，出峰也只是又矮又胖的小峰，并有多峰連接，這是色譜柱堵了嗎，還是其他原因？ |
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houqian387
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【答案】應助回帖
★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
lihongyan424: 金幣+1, 感謝應助，辛苦 2012-07-23 07:50:56
soundhorizo: 金幣+1 2012-07-23 07:57:56
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soundhorizo: 金幣+1 2012-07-23 07:57:56
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樓主給的信息不多，光看壓力無法判斷是不是堵了，因為柱長，粒徑，流動相種類都會影響柱壓。 如果想看柱效有沒有問題，就用色譜柱性能報告上面的方法檢測柱效，看柱壓，理論踏板數(shù)，脫尾等比出廠差多少就知道了？ 如果和出廠差不多，可能就是你方法或系統(tǒng)的問題了 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2012-07-23 07:10:00
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
|
應該是起“離子對”的作用吧。在做多肽類樣品的時候，300A孔徑的填料相對100A孔徑肯定要選擇性好點，也就是分離度相對比較好點。流動相加入TFA， 在反相色譜分離多肽和蛋白質的實驗中，使用三氟乙酸 (TFA) 作為離子對試劑是常見的手段。流動相中的三氟乙酸通過與疏水鍵合相和殘留的極性表面以多種模式相互作用，來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。 三氟乙酸優(yōu)于其他離子修飾劑的原因是它容易揮發(fā)，可以方便地從制備樣品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，對多肽在低波長處的檢測干擾很小。 不知對不對  |
3樓2012-07-23 07:53:20
yugijiang
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4樓2012-07-23 08:03:53
小醇醇
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5樓2012-07-23 10:55:58
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7樓2012-07-24 21:31:56
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