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檸檬酸合酶聚集沉淀實(shí)驗(yàn)
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請教:最近在做檸檬酸合酶的聚集實(shí)驗(yàn),買的是sigma的檸檬酸合酶,看資料說是檸檬酸合酶在43度條件下即可聚集沉淀。我做的具體條件是:預(yù)熱儀器到45度,在Tris鹽緩沖液中檸檬酸合酶的終濃度為0.5mM和1mM,取200ul于96孔板,同時(shí)以空白緩沖液做好對照(同時(shí)為防止加熱蒸發(fā)濃度改變,我盡可能在樣品周圍都加了空白緩沖液),置于預(yù)熱45度的儀器中,在400nm波長下讀取40min內(nèi)的吸光值。看文獻(xiàn)上的結(jié)果吸光值應(yīng)該是一個逐漸上升的過程,但是我的結(jié)果不是,無論是空白緩沖液還是有檸檬酸合酶的樣品在40min中內(nèi)都是一個值。真討厭做蛋白實(shí)驗(yàn)!真心 敗了 瘋了 求有經(jīng)驗(yàn)的高手答疑! |
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| 無論是空白緩沖液還是有檸檬酸合酶的樣品在40min中內(nèi)都是一個值——一定是測定儀器問題 |




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