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mikewang777木蟲 (小有名氣)
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[求助]
重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌問題
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各位大俠， 我做農(nóng)桿菌的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，結(jié)果一個(gè)轉(zhuǎn)化子也沒有，請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的同仁幫忙分析一下： 條件： 凍融轉(zhuǎn)化法 1。陽性對(duì)照長(zhǎng)有單菌落，對(duì)照用質(zhì)粒是別人的質(zhì)粒，大小和我的質(zhì)粒差不多，說明感受態(tài)是沒問題吧？ 2。質(zhì)粒是新提的，電泳檢測(cè)有兩條帶，都很亮，是不是和超螺旋，或線性，半開環(huán)有關(guān) ？ 質(zhì)粒已經(jīng) pcr,酶切檢測(cè)過了，均出帶 3。做了3次，結(jié)果都是不長(zhǎng)，師姐也做了好幾次，都不長(zhǎng)，說明應(yīng)該不是操作的問題吧？ 4。平板也換過，是卡納抗性，用別人的板也不長(zhǎng)，板的問題也不大吧？ 各位兄弟姐妹，我還有什么沒考慮到的嗎？ 十分迫切的得到答復(fù)��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mikewang777: 金幣+5, ★有幫助 2012-07-29 17:30:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mikewang777: 金幣+5, ★有幫助 2012-07-29 17:30:03
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我覺還是感受態(tài)的問題，可以購買呀，如果急用的話。也可能是質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的條件不同，這里有篇文獻(xiàn)是講感受態(tài)對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響的。希望有幫助。 重組質(zhì)粒導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌凍融法的研究.pdf 等2個(gè)文件 http://kuai.xunlei.com/d/GLILIOYQTOCX?p=130497 |
2樓2012-07-23 16:23:06
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