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ashnight鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
植物葉片胰蛋白酶活怎么測(cè)定？
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| 植物葉片胰蛋白酶用BAEE做底物，Tris-Hcl做緩沖液，胰蛋白酶液是如何制備的？求教各位大俠了。。 |
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2樓2012-11-17 21:11:53
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3樓2012-11-17 21:12:16
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
gyfgood: 金幣+5, 應(yīng)助指數(shù)+1, 手機(jī)回答的，辛苦了！ 2012-11-18 21:28:04
gyfgood: 金幣+5, 應(yīng)助指數(shù)+1, 手機(jī)回答的，辛苦了！ 2012-11-18 21:28:04
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以苯甲酰L—精氨酸乙酯(英文縮寫為BAEE)為底物，用紫外吸收法進(jìn)行測(cè)定。苯甲酰L—精氨酸乙酯在波長(zhǎng)253nm下的紫外吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于苯甲酰L—精氨酸(英文縮寫為BA)。在胰蛋白酶的催化下，隨著酯鍵的水解，苯甲酰L—精氨酸逐漸增多，反應(yīng)體系的紫外吸收宜隨之相應(yīng)增加。 取2個(gè)光程為1厘米的帶蓋石英比色杯，分別加入25℃予熱過(guò)的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml 0.001mol/L HCl，作為空白，校正儀器的253nm處光吸收零點(diǎn)。再在另一比色杯中加入0.2ml待測(cè)酶液(用量一般為10微克結(jié)晶的胰蛋白酶)，立即混勻并記時(shí)，每半分鐘讀數(shù)一次，共讀3~4分鐘。控制DA253/min 在0.05 ~ 0.100左右為宜。 繪制酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線，從曲線上求出反應(yīng)起始點(diǎn)吸光度隨時(shí)間的變化率(即初速度)DA253/min。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
4樓2012-11-18 10:19:54
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