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guoxinkun1金蟲 (初入文壇)
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[求助]
以1800的線性DNA做模板PCR怎么P不出來
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| 俺是以融合PCR出來的1800bp的線性片段做模板做PCR的，p了好幾次就是p不出來，請問是怎么回事啊？用線性片段做模板理論上行不行啊，是不是非得聯(lián)T載做成環(huán)狀質(zhì)粒��？（看小木蟲上有用Dpn1的，Dpn1是什么東西啊...）各位大俠，求助啊 |
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wu_shiyong
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guoxinkun13樓2012-07-26 09:31:21
gelois
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵積極分享經(jīng)驗 2012-07-26 15:24:20
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵積極分享經(jīng)驗 2012-07-26 15:24:20
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沒有必要連載體也可以P出來的啊。你的反應(yīng)體系，反應(yīng)條件是什么，說的具體一點，P不出來的原因有很多，退火溫度，酶，引物等等都會對結(jié)果有影響的。 Dpn1是一種酶，作用是降解消除模板質(zhì)粒DNA的。但是前提是你的模板是經(jīng)過轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒得到的，因為Dpn1是甲基化依賴型的，模板DNA帶有甲基才會被降解消除，而像你這樣的線性DNA一般是用不到這種酶的。 |
2樓2012-07-26 09:17:02
guoxinkun1
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4樓2012-07-26 17:06:16
guoxinkun1
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5樓2012-07-26 17:07:35
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