版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

返回列表

上一頁(yè)

本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MicEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看

reallpf

木蟲(chóng) (正式寫手)

MicEPI: 21
應(yīng)助: 150 (高中生)
金幣: 3388.3
散金: 2
紅花: 12
帖子: 342
在線: 72.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1892494
注冊(cè): 2012-07-14
性別: GG
專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, good 2012-08-10 16:21:22

對(duì)于你的問(wèn)題，我僅僅結(jié)合我做菌落PCR的情況，討論一下你說(shuō)的4個(gè)問(wèn)題。
1.菌落PCR挑菌，不要總是挑一大團(tuán)你看得見(jiàn)心里才放心，只需要牙簽尖頭輕輕刮一下即可，多了會(huì)影響PCR結(jié)果的。
2.平板放的時(shí)間越長(zhǎng)，菌落PCR的結(jié)果越不準(zhǔn)確，建議還是盡快做菌落PCR驗(yàn)證。但并不是說(shuō)時(shí)間久就難P出來(lái)，而是結(jié)果不準(zhǔn)確。因?yàn)?度菌是可以生長(zhǎng)的。當(dāng)然，我覺(jué)得沒(méi)有活化的必要。本來(lái)時(shí)間就久，如果還活化，容易造成交叉污染。
3.退火溫度最好是選擇陽(yáng)性對(duì)照做一個(gè)梯度PCR確定。如果你是通用引物，一般55度是沒(méi)有問(wèn)題的。當(dāng)然你也可以根據(jù)公式算，算出來(lái)減小5到10度就可以了。
4.菌落PCR是可靠的，但是一般要結(jié)合其它的方法一起證明。你決定菌落PCR是因?yàn)槟愕钠桨宸旁?度，菌還在生長(zhǎng)，特別是多次挑菌之后容易造成交叉污染。所以一般你的平板出來(lái)后，盡快做菌落PCR是沒(méi)有問(wèn)題的。在得到陽(yáng)性結(jié)果后就馬上劃線到一個(gè)新的平板，保藏菌種。以免交叉污染影響后續(xù)試驗(yàn)，更讓你懷疑菌落PCR的準(zhǔn)確性。

簡(jiǎn)單交流，僅供參考。

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2012-08-10 16:05:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

chenxiang29

銀蟲(chóng) (正式寫手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 302.1
散金: 70
紅花: 2
帖子: 576
在線: 215.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1252309
注冊(cè): 2011-04-01
性別: GG
專業(yè): 臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)

引用回帖:

7樓: Originally posted by zqp9110 at 2012-08-10 10:59:48
個(gè)人傾向于用Triton法快速提取純菌DNA，代替菌落PCR，感覺(jué)效果不錯(cuò)，不喜歡用菌直接PCR。

life technologies很便宜

贊一下

回復(fù)此樓

smile to the world

12樓2012-10-26 10:17:00

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

1049131934

銅蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 66.6
散金: 1
帖子: 123
在線: 30.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2021709
注冊(cè): 2012-09-22
專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

可以試著用試劑盒提一次質(zhì)粒DNA，然后再做PCR看看，可能就能P出來(lái)了

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2013-06-14 20:26:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhaoxiaopang

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 159.3
帖子: 183
在線: 90.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2647510
注冊(cè): 2013-09-11
性別: MM
專業(yè): 生物化工與食品化工

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

6樓: Originally posted by dgm1208 at 2012-08-10 09:53:33
另外，我在做的時(shí)候，有些第一遍可能p不出來(lái)，就再重新養(yǎng)一下，剛漲出來(lái)的時(shí)候再p一次，這樣把你的那些做一遍之后，應(yīng)該大部分都能p出來(lái)了，實(shí)在p不出來(lái)的，再去買試劑盒提一下DNA，再p···

我也是第一次能P出來(lái)，但是第二次就P不出來(lái)了，想不出來(lái)原因

贊一下

回復(fù)此樓

14樓2014-04-29 11:28:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dgm1208

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
金幣: 240.9
散金: 10
紅花: 3
帖子: 223
在線: 62.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1790671
注冊(cè): 2012-05-02
性別: GG
專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

14樓: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-04-29 11:28:31
我也是第一次能P出來(lái)，但是第二次就P不出來(lái)了，想不出來(lái)原因...

我看了你發(fā)的話題，不知道你的是什么菌哈，也不清楚你p的是哪個(gè)基因，一般菌落pcr我都是當(dāng)天晚上轉(zhuǎn)接一下平板，第二天早上挑一點(diǎn)那個(gè)剛長(zhǎng)出來(lái)的，大部分都能p出來(lái)，像你說(shuō)的，剛長(zhǎng)出來(lái)的能p出來(lái)，又長(zhǎng)了兩天沒(méi)p出來(lái)，我覺(jué)得很正常啊，多長(zhǎng)了兩天，菌變得皮厚了就不好p了，就和提DNa一樣，提DNA的時(shí)候也是要用新鮮的菌體，這樣壁薄，好破壁，好提···

贊一下

回復(fù)此樓

科研路艱辛···

15樓2014-04-29 12:44:03

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhaoxiaopang

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 159.3
帖子: 183
在線: 90.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2647510
注冊(cè): 2013-09-11
性別: MM
專業(yè): 生物化工與食品化工

引用回帖:

15樓: Originally posted by dgm1208 at 2014-04-29 12:44:03
我看了你發(fā)的話題，不知道你的是什么菌哈，也不清楚你p的是哪個(gè)基因，一般菌落pcr我都是當(dāng)天晚上轉(zhuǎn)接一下平板，第二天早上挑一點(diǎn)那個(gè)剛長(zhǎng)出來(lái)的，大部分都能p出來(lái)，像你說(shuō)的，剛長(zhǎng)出來(lái)的能p出來(lái)，又長(zhǎng)了兩天沒(méi)p出來(lái) ...

是梭菌，目的片段是在基因組上。其實(shí)我的平板放的時(shí)間也不久啊，就多長(zhǎng)了兩天而已，菌落變大了，那就再活化下試試吧，如果還是那樣的問(wèn)題就真的沒(méi)轍了，需要重新做轉(zhuǎn)化。。。

贊一下

回復(fù)此樓

16樓2014-04-29 16:00:56

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dgm1208

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
金幣: 240.9
散金: 10
紅花: 3
帖子: 223
在線: 62.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1790671
注冊(cè): 2012-05-02
性別: GG
專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)

引用回帖:

16樓: Originally posted by zhaoxiaopang at 2014-04-29 16:00:56
是梭菌，目的片段是在基因組上。其實(shí)我的平板放的時(shí)間也不久啊，就多長(zhǎng)了兩天而已，菌落變大了，那就再活化下試試吧，如果還是那樣的問(wèn)題就真的沒(méi)轍了，需要重新做轉(zhuǎn)化。。。...

恩試試吧祝你成功

贊一下

回復(fù)此樓

科研路艱辛···

17樓2014-05-07 09:34:01

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 celia2012 的主題更新

返回列表

上一頁(yè)

普通表情龍兔虎貓

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +4	脫穎而出 2026-03-16	13/650	2026-03-20 08:32 by 脫穎而出
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5	February_Feb 2026-03-19	5/250	2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 081700化工學(xué)碩調(diào)劑 +3	【1】 2026-03-16	3/150	2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 307求調(diào)劑 +9	冷笙123 2026-03-17	9/450	2026-03-19 22:44 by 學(xué)員8dgXkO
[考研] 271材料工程求調(diào)劑 +6	.6lL 2026-03-18	6/300	2026-03-19 15:41 by haoshis
[考研] 266求調(diào)劑 +5	陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-14	10/500	2026-03-19 15:08 by 陽(yáng)陽(yáng)哇塞
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +4	生物工程調(diào)劑 2026-03-16	12/600	2026-03-19 11:10 by 生物工程調(diào)劑
[考研] 0703化學(xué) 305求調(diào)劑 +4	FY_yy 2026-03-14	4/200	2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +3	生物工程調(diào)劑 2026-03-17	7/350	2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 085600材料與化工 +5	安全上岸！ 2026-03-16	5/250	2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 311求調(diào)劑 +6	26研0 2026-03-15	6/300	2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑總分331 +3	ZY-05 2026-03-13	3/150	2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3	Eember. 2026-03-17	9/450	2026-03-18 10:28 by Eember.
[考博] 26博士申請(qǐng) +3	1042136743 2026-03-17	3/150	2026-03-17 23:30 by 輕松不少隨
[考研] 283求調(diào)劑 +3	聽(tīng)風(fēng)就是雨； 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:41 by 熱情沙漠
[考研] 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑 +3	zhouzhen654 2026-03-16	3/150	2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3	藥學(xué)chy 2026-03-15	4/200	2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 326求調(diào)劑 +4	諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15	7/350	2026-03-16 17:11 by 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a>
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3	自由煎餅果子 2026-03-16	3/150	2026-03-16 14:10 by 運(yùn)氣yunqi
[考研] 招收0805（材料）調(diào)劑 +3	18595523086 2026-03-13	3/150	2026-03-14 00:33 by 123%、