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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNA凝膠純化回收問題 已有1人參與
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大家好！我想對PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠純化回收。買了Takara凝膠回收試劑盒，名為Takara MiniBEST Agrose Gel DNA Extraction Kit Ver 3.0。按照說明書，“分離的DNA片段小于400bp時(shí)，應(yīng)加入終濃度為20%的異丙醇�！钡珱]有指出加入的異丙醇的量呀！具體要加入多少呢？此外，還要求配制3M 醋酸鈉（pH 5.2），我是稱量61.5g無水乙酸鈉，加入200ml的蒸餾水，用乙酸調(diào)pH到5.2再定容到250ml。但配好之后要高壓滅菌嗎？還是直接配好就可以使用？ 請有經(jīng)驗(yàn)的高手幫個(gè)忙，謝謝了！ |
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2樓2012-08-12 09:05:11
chenguestc
木蟲 (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-13 14:59:22
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異丙醇是使核酸富集沉淀，加入異丙醇，能夠奪取RNA/DNA周圍的水分使其聚集而發(fā)生沉淀。但一般要先加入NaCl/NaAc，沉淀前核酸一般帶負(fù)電，鈉離子與之中和，因此消除同性電荷的相斥，更易沉淀核酸。 配置3M鹽溶液最好滅菌，雖然是高鹽，絕大部分細(xì)菌都無法生存在其中，但是自然界還真有耐鹽菌哈。不論是否對你的結(jié)果有影響，滅個(gè)菌是嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖龇ā? |
3樓2012-08-13 08:23:19
木子小鈺
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4樓2014-09-23 09:37:12
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