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淘氣笨笨21新蟲 (初入文壇)
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[求助]
RACE5‘一直做不出來(lái)怎么辦？
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小女子最近釣一個(gè)基因保守估計(jì)在5k以上，3’做出來(lái)了，5‘進(jìn)展很慢，每次都是兩輪RACE才會(huì)出200-300bp片段。更換過模板，引物也換了不下20對(duì)，退火溫度設(shè)計(jì)在65左右，用的66-64-62-60的touchdown程序。就是沒有長(zhǎng)片段出來(lái)。每次巢式后都有很多條帶，但都很淺，而且都挨得很近，難以割膠回收，是不是不是特異性的條帶��？如何提高條帶特異性，讓條帶又少又亮？ 另外這次有好幾個(gè)基因出了700-800條帶，連接轉(zhuǎn)化后跑菌液PCR也有700-800bp，為什么測(cè)序后比對(duì)只有質(zhì)粒序列呢？ 請(qǐng)各位高手指點(diǎn)迷津。不勝感激。 |
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4樓2012-08-15 08:46:00
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