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l20065091新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教為什么我的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳后條帶有些彌散！
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我是做微衛(wèi)星標(biāo)記的，用的8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，跑完后條帶都有些彌散，但是maker不彌散，請問是什么問題，我恒定電壓跑的，一般跑一個(gè)小時(shí)多一點(diǎn)，謝謝指教！！ |
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chenguestc
木蟲 (職業(yè)作家)
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-15 15:37:17
l20065091: 金幣+3, ★★★很有幫助 2012-08-15 17:22:55
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跟跑膠沒有關(guān)系。樓主把循環(huán)數(shù)降低一些，把退火溫度提高一點(diǎn)就好了。 主帶上面有非特異帶，說明你的循環(huán)數(shù)過多，因?yàn)镾SR是短而重復(fù)，因此，循環(huán)數(shù)過多的話，如果PCR某一成分用完，PCR產(chǎn)物就變性，復(fù)性，容易形成滑鏈結(jié)合，因此出現(xiàn)非特異帶，因而減少循環(huán)數(shù)可改善這種情況。 而主帶彌散，說明退火溫度偏低，或者模板濃度太高或者鎂離子濃度過高，可以加入少量二甲基亞砜提高擴(kuò)增特異性。 |
2樓2012-08-15 13:05:29
3樓2012-08-15 16:36:19
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l20065091
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