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consist10金蟲 (正式寫手)
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[求助]
包涵體 復(fù)性
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請(qǐng)教親們一個(gè)問(wèn)題：包涵體變性復(fù)性后為什么掛GST柱子時(shí)蛋白就析出了呢？ 變性液：8M尿素， 復(fù)性：4度透析復(fù)性 8M-6M-4M-2M-1M-0.5M尿素-PBS，復(fù)性液中含有L-精氨酸，氧化型和還原型谷胱甘肽。 為什么進(jìn)行GST純化掛柱時(shí)蛋白就析出來(lái)了呢？ 急求 請(qǐng)教親們 有金幣答謝 |
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consist102樓2012-08-21 14:32:39
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3樓2012-08-21 15:45:36
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4樓2012-08-21 16:26:38
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5樓2012-08-21 19:03:59
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consist10: 金幣+3, ★有幫助 2012-08-22 09:40:17
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看你的描述，柱子可能有變性劑沒(méi)洗掉，洗徹底再平衡。 溫度的原因。我覺(jué)得蛋白是要溫柔對(duì)待的，特別是變復(fù)性之后的，呵呵，你可以用在冰上預(yù)冷的buffer去平衡柱子，最好能在4℃冰庫(kù)或者血液冷藏箱里操作。 分子伴侶說(shuō)實(shí)話了解不多，不過(guò)分子伴侶是在細(xì)胞內(nèi)幫助其他含多肽的結(jié)構(gòu)完成正確的組裝，所以，我覺(jué)得沒(méi)必要去掉。 多交流啊。 |
6樓2012-08-22 08:45:16
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8樓2012-08-22 11:19:41
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consist10: 金幣+6, ★★★很有幫助, 多謝您了 2012-08-24 09:15:37
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文獻(xiàn) Purification and refolding optimization of recombinant bovine enterokinase light.pdf http://kuai.xunlei.com/d/GAVYCJCTOBJF?p=130497 |
9樓2012-08-22 11:21:39
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