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夢(mèng)之奮斗新蟲 (初入文壇)
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[求助]
克隆的高手請(qǐng)指點(diǎn)一二
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| 請(qǐng)問各位做克隆的大俠：克隆基因的過程中拿3'端片段的時(shí)候用race還是反向PCR技術(shù)會(huì)好做一點(diǎn)啊，成功的幾率要大點(diǎn)呢？ |
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mgangle
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4樓2012-08-24 20:49:14
mgangle
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流問題。 2012-08-24 21:34:44
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| 3·端的話用RACE做好些，也挺方便！cDNA合成時(shí)不要用OligdT，用M4T反轉(zhuǎn)錄，這樣你只要設(shè)計(jì)3條不同位置的上游引物（分別命名為P1，P2，P3），以M4T為下游引物，第一次用P1和M4T cDNA為模板，第二次用P2和M4T 第一次PCR產(chǎn)物為模板，第三次用P3和M4T 第二次PCR產(chǎn)物為模板，OK，搞定！（M4T序列百度就能百出來，做病毒常用的引物） |
2樓2012-08-24 15:26:22
夢(mèng)之奮斗
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3樓2012-08-24 20:45:22
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5樓2012-08-24 23:01:20
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