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[交流]
微生物菌種的復(fù)壯
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用甘油管保存的菌由于時(shí)間較長，且已經(jīng)傳代多次了，需要從甘油管里選出酶活較高的菌。經(jīng)過平板涂布、劃線分離挑出單菌落、種子和發(fā)酵培養(yǎng)基后竟然測不出酶活了，這過程中會出現(xiàn)什么問題呢？（甘油管的菌都是有酶活的） 這個(gè)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)跟同學(xué)重復(fù)幾遍了，都沒有結(jié)果。且平板上長出的單菌落形態(tài)基本相似，也從劃線平板上挑出多株單菌落做多組實(shí)驗(yàn)，依然沒有結(jié)果。 請各位高手指教這過程中有什么問題，如果有什么好的復(fù)壯方法也望不吝賜教！ [ Last edited by betty on 2012-8-24 at 18:49 ] |
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 女人香 |
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betty: 金幣+3, 甘油管的酶活倒是有的，就是里面的菌可能不夠純，所以用平板劃線純化，但是經(jīng)過純化的單菌落沒酶活 2012-08-31 14:31:02
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
betty: 金幣+3, 甘油管的酶活倒是有的，就是里面的菌可能不夠純，所以用平板劃線純化，但是經(jīng)過純化的單菌落沒酶活 2012-08-31 14:31:02
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我的菌發(fā)酵前也都會進(jìn)行活化，如果做大罐還有一級種子和二級種子。還沒有碰到過酶活丟失的情況。稍弱倒是會存在。你活化的也沒有酶活的話你看要不多活化幾次？如果你的酶的底物能作為碳源或氮源的話，試試選擇培養(yǎng)基活化看看，應(yīng)該可以的。 另外你說過你的甘油管極影經(jīng)過多次傳代了，利用pcr檢驗(yàn)一下你的目的基因是否丟失了。不過這個(gè)可能性很小，一般發(fā)酵用的宿主都是可以穩(wěn)定遺傳很多代的。 |
15樓2012-08-31 14:26:39
zhangxingc
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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betty: 金幣+5, 你的做法有一定道理，謝謝回帖！ 2012-09-17 09:49:00
scelab: 金幣+5, x謝謝熱心交流~ :) 2012-09-17 12:40:28
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betty: 金幣+5, 你的做法有一定道理，謝謝回帖！ 2012-09-17 09:49:00
scelab: 金幣+5, x謝謝熱心交流~ :) 2012-09-17 12:40:28
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樓主，針對這種情況我們也曾遇到過，慶幸的是你的菌還能活化起來。 我的做法可能不夠嚴(yán)謹(jǐn)，但能解決一下問題。我將菌種直接在液體中活化，然后傳菌2-3代，用第3或第4代活力較旺的菌再進(jìn)行平板劃線挑單菌。然后進(jìn)行下一步試驗(yàn)。 多活化幾代的目的是希望將長勢較好的菌也就是活性較高的菌保留下來，通過傳代培養(yǎng)，它們的數(shù)量會增多，活性表現(xiàn)得更完全。 不夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼f法是，可能這種挑選出來的菌會有部分改變，至于具體怎么改變，我也說不準(zhǔn)。 |
17樓2012-09-17 08:44:31
2樓2012-08-24 21:57:03
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
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3樓2012-08-25 00:04:01
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rainwander: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-08-26 08:32:25
betty: 金幣+2, 你的回帖很詳盡，謝謝！ 2012-08-26 10:10:24
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betty: 金幣+2, 你的回帖很詳盡，謝謝！ 2012-08-26 10:10:24
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在做發(fā)酵的廠家，菌種復(fù)壯工作是一種日常工作。 甘油管一般劃線后長出的單菌落做標(biāo)記單獨(dú)做發(fā)酵測試測酶活和轉(zhuǎn)化水平，平板暫時(shí)不能丟棄，然后把在發(fā)酵小試上表現(xiàn)好的單菌落再做放大，放大后在與生產(chǎn)上的菌種作對比，如果轉(zhuǎn)化水平高于生產(chǎn)水平，則做進(jìn)一步穩(wěn)定性考察后作為生產(chǎn)菌種使用。 |
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簡單回復(fù)
85319748611樓
2012-08-30 18:35
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I_Gabriel13樓
2012-08-31 09:48
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zhangxingc21樓
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