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胡小喜

新蟲 (小有名氣)

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[求助] 有沒有人做過酶譜電泳呢？請教下

最近要做蛋白酶的酶譜電泳。有一種方法就是先做一塊常規(guī)蛋白酶的酶譜電泳凝膠，另外配置一個(gè)酪蛋白凝膠，然后把第一塊壓倒第二塊上水解酪蛋白，但是實(shí)驗(yàn)中由于壓在一塊，酪蛋白凝膠拿起來就破了！令看資料有一種方法是就制作一塊凝膠，在凝膠中加0.01%的明膠，不知道是怎么操作的，是用水把明膠制成0.01%的溶液在加到常規(guī)的膠液混合嗎，還是把明膠固體加到凝膠液里，明膠不是很難溶解嗎？是怎么做到的？一般明膠要加多少量啊，望有經(jīng)驗(yàn)的人指導(dǎo)下cat39:

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1樓 2012-08-24 20:42:12

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冼亮淀粉酶

專家顧問 (知名作家)

生物大分子降解酶

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
rainwander: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵(lì)交流 2012-08-25 07:54:02

取粗酶液樣品跑一塊非變性聚丙烯酰胺凝膠，溴酚藍(lán)到膠的末端，使得蛋白質(zhì)能分得開但又沒有跑出去。制作一塊瓊脂糖平板，含有適量底物，不一定需要用培養(yǎng)基來做，就是含有能顯色物質(zhì)的固體平板就行了。把非變性膠貼在平板上，在特定的溫度下孵育一定時(shí)間。膠里的蛋白質(zhì)會擴(kuò)散一部分到平板里，降解底物，顯色。

我的是alpha淀粉酶，平板有瓊脂粉、淀粉、曲利苯藍(lán)和水，可以形成一條略顯紅色的降解帶。

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流星來時(shí)我許了個(gè)愿，愿我有吃有喝還有舒服的豬圈。討厭發(fā)帖前不搜索論壇重復(fù)發(fā)帖和僅把論壇當(dāng)解決問題工具，久不看論壇一來就提問者，寧棄EPI和VIP也不回帖。

2樓2012-08-24 23:54:00

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