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黑曲霉纖維素酶活測定遇到問題！求解。。。
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我使用國標農用微生物菌劑中的纖維素酶活測定方法，也就是DNS測定法，可是我做了很多次，算出來的酶活都是300--1000，今天老師讓我測定一個樣品，我測出來是1125，可她告訴我，北京質檢中心測定的是4.84，我就奇怪了，按照這個國標里的計算公式，不可能測出4.84的。具體過程如下，請大家看看有什么問題沒。先謝過！ 1、用100ug/ml的標準葡萄糖，在試管中稀釋不同倍數來繪制標準曲線，但葡萄糖稀釋液的總量保證是5ml，然后加入3ml的DNS試劑，沸水浴5分鐘，水冷，在490nm下測定OD，繪制標準曲線。 2、樣品取10g，加入100ml水，靜置20分鐘，震蕩半小時，四層紗布過濾，然后3000轉/分離心十分鐘，此時稀釋倍數K是10。 3、三個試管，一個空白，兩個對照，對照里加入1ml的樣品溶液，再加入4ml的60℃的CMC緩沖液，之后放入60度水浴鍋內加熱20分鐘，取出后立即加入3ml的DNS試劑，放入沸水浴里五分鐘，水冷，490nm測定OD。 4、纖維素酶活公式 U=k×（m1-m2）/20. .如果按照質檢中心測定的U是4點多的話，這個葡萄糖的m差值就應該在10ug左右，但是我的標準曲線里，400ug的葡萄糖的OD值已經是0.003，10ug根本就顯示不出來，他們是怎么測定出5的？？請做過給指點下吧，謝謝��！ |
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