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flychess銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
Sephadex凝膠色譜法測定青霉素類高分子雜質(zhì)的機(jī)理 已有2人參與
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| 請教牛人：Sephadex凝膠色譜法測定青霉素類高分子雜質(zhì)的機(jī)理，在操作時為什么要分別在緩沖鹽和純水中進(jìn)行，為什么要加入葡聚糖2000？書上的原理都說的很籠統(tǒng)，能詳細(xì)點(diǎn)嗎？最近剛接觸，發(fā)現(xiàn)很多都不懂。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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凝膠色譜分析方法的原理 在Sephadex G-10凝膠色譜系統(tǒng)中，由于Sephadex G-10的排阻分子量僅為700d，因此，除部分寡聚物外，β－內(nèi)酰胺類抗生素中的高分子雜質(zhì)在色譜過程中均不保留；即所有的高分子雜質(zhì)表現(xiàn)為單一的色譜峰，其Kav＝0。在特定條件下，β－內(nèi)酰胺類抗生素由于分子間的氫鍵、靜電相互作用、疏水相互作用等次級相互作用，可以形成締合物，導(dǎo)致其表觀分子量增大；此時在Sephadex G-10凝膠色譜系統(tǒng)中和高分子雜質(zhì)具有相似的色譜行為，即在Kav＝0處表現(xiàn)為單一的色譜峰。利用此原理，在Sephadex G-10凝膠色譜系統(tǒng)中，以藥物自身為對照品，測定其在特定條件下締合時的峰響應(yīng)指標(biāo)；再改變色譜條件，測定樣品中的高分子雜質(zhì)和藥物分離后在Kav＝0處的峰響應(yīng)指標(biāo)；按外標(biāo)法計算，即得藥品中的高分子雜質(zhì)相當(dāng)于藥品本身的相對含量。 |
8樓2014-03-20 09:37:11
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9樓2014-03-20 16:54:03
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