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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


[交流] 柱層析損失樣品太多,怎么辦

我每次上柱層析,感覺下來的量都很少,一個(gè)上了35g樣,只下來了10g;一個(gè)上了15g樣品,之下來6g;一個(gè)上了6g樣品,下來了有兩三克吧,感覺這個(gè)還算多的;現(xiàn)在上了個(gè)小柱,1g樣品,估計(jì)只下來了幾十毫克。為什么會(huì)損失這么多樣品啊,怎樣能減少損失???
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西安事變

木蟲 (職業(yè)作家)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
柱層析損失大,得率低,無非是樣品被吸附的過多,而吸附之所以太多,可能是樣品極性太大,或者層析拖的時(shí)間過長,或者兩者兼而有之。如果主要是前者,那么可以考慮用反相柱或者大孔吸附樹脂,如果是時(shí)間太久造成的,可以考慮首先快速劃段,把樣品分成有代表性的幾個(gè)部分,然后針對目標(biāo)成分來細(xì)分。不能指望在一根層析柱上把多個(gè)極性不同的化合物逐個(gè)洗脫下來,那樣耗時(shí)太久,不現(xiàn)實(shí)。
17樓2012-09-07 12:10:55
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dmm1111

新蟲 (小有名氣)


★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
leecius: 金幣+1, 謝謝參與。 2012-09-06 09:18:23
硅膠吸附嚴(yán)重,可以濕法上樣,或者用葡聚糖柱子可以減少損失
2樓2012-09-05 23:03:34
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wangfei.ac

鐵桿木蟲 (正式寫手)


★ ★
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leecius: 金幣+1, 謝謝參與。 2012-09-06 09:18:28
不宜洗脫過長的時(shí)間,時(shí)間越長,死吸附越嚴(yán)重;極性中等或中等偏大的,還是采用反相材料為好,損失小。
3樓2012-09-06 08:41:27
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
2樓: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-05 23:03:34
硅膠吸附嚴(yán)重,可以濕法上樣,或者用葡聚糖柱子可以減少損失

謝謝!我一直都是采用的拌樣的方法, 干法濕法對樣品沒有什么要求嗎,是不是只要溶解性好的都可以采用濕法上樣
4樓2012-09-06 08:58:32
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
3樓: Originally posted by wangfei.ac at 2012-09-06 08:41:27
不宜洗脫過長的時(shí)間,時(shí)間越長,死吸附越嚴(yán)重;極性中等或中等偏大的,還是采用反相材料為好,損失小。

謝謝!我看有個(gè)說法是每個(gè)梯度洗4-8個(gè)柱體積,可是我的量本來就下來的少,要是只洗4-8個(gè)柱體積的話那夠用嗎,我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例,所以后來我就一直是洗到?jīng)]東西時(shí)才換的比例,但是后來發(fā)現(xiàn)這樣洗下來的東西也很少而且花費(fèi)時(shí)間太長,
5樓2012-09-06 09:04:49
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dmm1111

新蟲 (小有名氣)



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4樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-06 08:58:32
謝謝!我一直都是采用的拌樣的方法, 干法濕法對樣品沒有什么要求嗎,是不是只要溶解性好的都可以采用濕法上樣...

在樣品量比較小的時(shí)候濕法上樣比較好,樣品量太大這種方法就不太適合,或者你可以采用半干法上樣
6樓2012-09-06 11:34:13
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
6樓: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-06 11:34:13
在樣品量比較小的時(shí)候濕法上樣比較好,樣品量太大這種方法就不太適合,或者你可以采用半干法上樣...

謝謝!什么叫半干法上樣
7樓2012-09-06 11:35:23
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dmm1111

新蟲 (小有名氣)


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葉落雨枯: 金幣+2 2012-09-08 10:08:40
引用回帖:
7樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-06 11:35:23
謝謝!什么叫半干法上樣...

先把硅膠用溶劑浸濕上柱,待硅膠沉降均勻之后把拌好硅膠的樣品上柱,這樣有助于樣品走的均勻,分層效果比較好
8樓2012-09-06 13:50:51
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氫化大雪

木蟲 (著名寫手)



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引用回帖:
2樓: Originally posted by dmm1111 at 2012-09-05 23:03:34
硅膠吸附嚴(yán)重,可以濕法上樣,或者用葡聚糖柱子可以減少損失

弱弱地問一句濕法上樣為什么就可以減少損失呢,求解釋
9樓2012-09-06 19:33:28
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206patjie

銀蟲 (小有名氣)


★ ★
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karl2100: 金幣+1, 謝謝回復(fù)! 2012-09-06 23:03:30
如果你的東西不難分的話 就相對加大一下溶劑極性或加壓過柱
10樓2012-09-06 21:48:55
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liupengp02

金蟲 (正式寫手)


★ ★
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karl2100: 金幣+1, 謝謝發(fā)言! 2012-09-06 23:04:02
樣品在比較純時(shí)不宜用硅膠了,尤其是量小時(shí),可以試試其他的填料。
11樓2012-09-06 22:01:12
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liupengp02

金蟲 (正式寫手)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
5樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
謝謝!我看有個(gè)說法是每個(gè)梯度洗4-8個(gè)柱體積,可是我的量本來就下來的少,要是只洗4-8個(gè)柱體積的話那夠用嗎,我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例,所以后來我就一直是洗到?jīng)]東西時(shí) ...

我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例

向你學(xué)習(xí)哈。在梯度洗脫時(shí),用一個(gè)比例洗,極性大的不是洗不下來,是洗脫很慢,一直用一個(gè)比例洗,很難洗到向你老師說的( 我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例  )
你說呢,向你請教。
12樓2012-09-06 22:04:35
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axiu3961

捐助貴賓 (職業(yè)作家)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
是吸附了還是反應(yīng)掉了,還是都有?.知道原因才好對證下藥
14樓2012-09-06 22:20:09
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
14樓: Originally posted by axiu3961 at 2012-09-06 22:20:09
是吸附了還是反應(yīng)掉了,還是都有?.知道原因才好對證下藥

怎么看是吸附了還是反應(yīng)了啊,謝謝!
15樓2012-09-07 11:00:54
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
11樓: Originally posted by liupengp02 at 2012-09-06 22:01:12
樣品在比較純時(shí)不宜用硅膠了,尤其是量小時(shí),可以試試其他的填料。

謝謝!我的樣品點(diǎn)薄層板時(shí)顯示兩個(gè)主斑點(diǎn),但是還有沒有其他副斑點(diǎn)就不知道了,我們實(shí)驗(yàn)好像除了硅膠就只有聚酰胺和大孔樹脂了,這兩個(gè)應(yīng)該是都不能用于分單體的吧
16樓2012-09-07 11:06:14
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
17樓: Originally posted by 西安事變 at 2012-09-07 12:10:55
柱層析損失大,得率低,無非是樣品被吸附的過多,而吸附之所以太多,可能是樣品極性太大,或者層析拖的時(shí)間過長,或者兩者兼而有之。如果主要是前者,那么可以考慮用反相柱或者大孔吸附樹脂,如果是時(shí)間太久造成的, ...

非常感謝您的回帖!再請教一個(gè)問題,無論是劃段還是收集,是要把前一個(gè)比例的都洗完了再換下一個(gè)比例,還是只需要收集一定的體積就可以?
18樓2012-09-07 12:17:53
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ninujuki

禁蟲 (小有名氣)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
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19樓2012-09-07 13:15:29
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search8699

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
5樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
謝謝!我看有個(gè)說法是每個(gè)梯度洗4-8個(gè)柱體積,可是我的量本來就下來的少,要是只洗4-8個(gè)柱體積的話那夠用嗎,我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例,所以后來我就一直是洗到?jīng)]東西時(shí) ...

有時(shí)候并不能單純的去看柱體積。你就用梯度洗,然后檢測,知道你需要的點(diǎn)下來了就好了。 如果你是很粗的樣的話,吸附的多點(diǎn)也很正常啊,畢竟不溶解的雜質(zhì)什么的比較多
20樓2012-09-07 14:31:21
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
19樓: Originally posted by ninujuki at 2012-09-07 13:15:29
有條件還是買一點(diǎn)凝膠填料,不損失樣品,我一直用的凝膠柱,對于量少的上硅膠柱會(huì)被吸附完的。

這樣啊,那看來這次的能有幾十毫克就不錯(cuò)了
21樓2012-09-07 20:52:36
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西安事變

木蟲 (職業(yè)作家)


★ ★ ★
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葉落雨枯: 金幣+2 2012-09-08 10:09:00
引用回帖:
18樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-07 12:17:53
非常感謝您的回帖!再請教一個(gè)問題,無論是劃段還是收集,是要把前一個(gè)比例的都洗完了再換下一個(gè)比例,還是只需要收集一定的體積就可以?...

我的經(jīng)驗(yàn)吧,首先根據(jù)TLC來判斷,用哪個(gè)比例的溶劑洗脫哪幾個(gè)成分。柱層析的時(shí)候,對接收的流分再用TLC檢測,如果目標(biāo)成分已經(jīng)比較少了,就該及時(shí)增加極性,進(jìn)入下一個(gè)段了,不要指望能切得干凈利索一點(diǎn)交叉都沒有,那要求很高的經(jīng)驗(yàn)值,只有做的足夠多了才能達(dá)到這種境界。當(dāng)你一心等著前一個(gè)極性段的成分完全流出時(shí),往往事與愿違,相鄰的極性段已經(jīng)下來了。至于收集一定的體積,這同樣要根據(jù)樣品的量、柱子的規(guī)模以及洗脫的進(jìn)展情況來調(diào)整,不能太死板。
22樓2012-09-07 22:16:11
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
22樓: Originally posted by 西安事變 at 2012-09-07 22:16:11
我的經(jīng)驗(yàn)吧,首先根據(jù)TLC來判斷,用哪個(gè)比例的溶劑洗脫哪幾個(gè)成分。柱層析的時(shí)候,對接收的流分再用TLC檢測,如果目標(biāo)成分已經(jīng)比較少了,就該及時(shí)增加極性,進(jìn)入下一個(gè)段了,不要指望能切得干凈利索一點(diǎn)交叉都沒有 ...

謝謝!了解了不 少,不過還是很模糊,看來還得在試驗(yàn)中不斷摸索
23樓2012-09-08 10:04:37
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ldy1985

木蟲 (正式寫手)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
請問你這個(gè)上樣35g,用了多少的硅膠,是不是得好幾百克呀
再就是收集液你一般都是怎么處理的了,用旋蒸么?
謝謝!
24樓2013-03-19 20:54:24
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葉落雨枯

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
24樓: Originally posted by ldy1985 at 2013-03-19 20:54:24
請問你這個(gè)上樣35g,用了多少的硅膠,是不是得好幾百克呀
再就是收集液你一般都是怎么處理的了,用旋蒸么?
謝謝!

謝謝!這個(gè)具體上了多少硅膠我忘了,應(yīng)該是根據(jù)書上的那個(gè)比例來的。收集液確實(shí)使用的旋蒸,我們那兒只有旋蒸
25樓2013-03-21 12:32:10
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張廣玉417

新蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
5樓: Originally posted by 葉落雨枯 at 2012-09-06 09:04:49
謝謝!我看有個(gè)說法是每個(gè)梯度洗4-8個(gè)柱體積,可是我的量本來就下來的少,要是只洗4-8個(gè)柱體積的話那夠用嗎,我剛開始洗大柱子的時(shí)候老板說要洗到化學(xué)檢測沒反應(yīng)后才換下一個(gè)比例,所以后來我就一直是洗到?jīng)]東西時(shí) ...

看到這一樓我就知道你為什么少了 ,每個(gè)梯度2個(gè)體積就是最好了,你太多了的話肯定吸附,別的原因都不用看不用找,就是這個(gè)原因。我們要求走完死體積3個(gè)小時(shí)之內(nèi)把柱子過下來。
26樓2015-06-11 21:33:35
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2012-09-06 22:07   回復(fù)  
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