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悠悠6690新蟲 (小有名氣)
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測蔗糖合成酶,但KCN買不到怎么半啊?
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SS合成方向的活性測定參照Lowell等〔13〕和Hubbard等〔5〕的方法,并加以改進(jìn)。在70μL反應(yīng)體系中含80 mmol·L- 1Hepes2NaOH緩沖液 (pH 8. 5) , 5 mmol·L- KCN, 5 mmol·L- 1NaF , 100 mmol·L- 1果糖, 15 mmol·L- 1UDP2Glucose ,酶提取液; 30℃反應(yīng)30 min ,加入70μL 5 mol·L- 1NaOH終止反應(yīng),沸水浴10 min ,冷卻后加入1 mL 0. 14 %的蒽酮 (溶解在13. 8 mol·L- 1的H2SO4中), 40℃反應(yīng)20 min ,冷卻后測定A620。對照反應(yīng)體系中不含果糖。都齊了,就差KCN了,賣藥品的說是劇毒物,拿不到貨!哎,那這么多文章上都用的KCN是從哪弄的啊？糾結(jié)!能不能用鐵氰化鉀代替啊 ？ [ Last edited by 悠悠6690 on 2012-9-7 at 20:42 ] |
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悠悠6690: 回帖置頂 2012-09-09 16:12:47
悠悠6690: 回帖置頂 2012-09-09 16:12:47
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棉纖維中SS（合成方向）活性測定 藥品 濃度 體積 藥品 濃度 體積 SS 30度保溫30min，100度水浴1 min NaoH 2N 0.1ml D-果糖 50mM 0.1ml 沸水浴10min，冷卻 UDPG 14mM 0.2ml HCL 30% 3.5 ml HEPES-NaoH Ph7.5 50 mM 0.1ml 間苯二酚 0.1% 1 ml MgCl2 50mM 0.05ml 搖勻，80度水浴10min，A480比色 粗酶液 0.1ml 注：上表左半部中的操作在冰浴中進(jìn)行 1酶液提取 0.5g（0.2-.04g小麥籽粒），加3mlHepes-NaoH緩沖液（PH7.5），冰浴研磨，加2ml沖洗（共5ml），220rd離心10min（0—4度） 2酶活性測定 原理：UDPG + 果糖 SS 蔗糖 + UDP 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線： 配制1 mg/ml的蔗糖母液，稀釋成200 μg/ml，標(biāo)線濃度梯度為0、20、40、60、80、100、120 μg/ml，與上述方法相同，繪制蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，活力以mg sucrose g-1 FW h-1表示。 Hepes 50 mM 2000 mL 用25.83 g D-果糖50 mM 100 mL 用0.9008 g UDPG 14 mM 100 mL用0.7929 g MgCl2 50 mM 100 mL 用1.0165 g NaOH 2N 100 mL用8 g HCl 30% 1000 mL用811 mL37%HCl 間苯二酚 0.1% 500 mL用0.5 g（溶劑為95%乙醇） |
3樓2012-09-08 12:42:03
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