glt0629

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[交流] P450酶活

最近在做P450的酶活實(shí)驗(yàn)，用7-乙氧基香豆素作為底物，可是發(fā)現(xiàn)我NADPH的熒光值很高，也就是說我的對(duì)照里面(即不加酶，只加7-乙氧基香豆素和NADPH，用PBS補(bǔ)足體積)的熒光值特別高，有時(shí)候比實(shí)驗(yàn)組還高，這是為什么呢？有遇到過這樣問題的大俠們幫幫忙吧，還有就是用試鹵靈做標(biāo)曲，一般試鹵靈的濃度是多少？用什么溶解試鹵靈呢？麻煩大家?guī)臀蚁胂�，非常感謝了。

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1樓 2012-09-09 22:30:40

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biolio2009

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glt0629: 金幣+3 2012-09-10 20:22:46

你的反應(yīng)底物7-乙氧基香豆素，自己發(fā)生轉(zhuǎn)化了，導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果不是酶促反應(yīng)的結(jié)果。

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2樓2012-09-10 09:06:50

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glt0629

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引用回帖:

2樓: Originally posted by biolio2009 at 2012-09-10 09:06:50
你的反應(yīng)底物7-乙氧基香豆素，自己發(fā)生轉(zhuǎn)化了，導(dǎo)致這個(gè)結(jié)果不是酶促反應(yīng)的結(jié)果。

關(guān)鍵是我不加底物也是這樣，難道NADPH本來就有熒光值？這個(gè)熒光值不應(yīng)該是7-乙氧基香豆素反應(yīng)后生成7-羥基香豆素發(fā)出的熒光嗎？謝謝，非常感謝你

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11樓2012-09-10 20:22:28

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gkf123

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????

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3樓2012-09-10 09:33:48

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toughxu

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路過，學(xué)習(xí)�。�！

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10樓2012-09-10 10:42:21

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gcworm

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頂你

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15樓2012-09-10 22:30:32

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biolio2009

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引用回帖:

11樓: Originally posted by glt0629 at 2012-09-10 20:22:28
關(guān)鍵是我不加底物也是這樣，難道NADPH本來就有熒光值？這個(gè)熒光值不應(yīng)該是7-乙氧基香豆素反應(yīng)后生成7-羥基香豆素發(fā)出的熒光嗎？謝謝，非常感謝你...

7-乙氧基香豆素不會(huì)有熒光吧你的空白有沒有熒光？
還有NADPH有沒有熒光分別測(cè)定后分析分析

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17樓2012-09-11 22:24:11

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琚陽

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glt0629: 金幣+1 2012-12-26 23:53:05

你有沒有關(guān)于p450與抗性相關(guān)的英文文獻(xiàn)�。�

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18樓2012-11-03 16:13:21

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xiuwei001

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glt0629: 金幣+3 2012-12-26 23:52:57

p450酶活測(cè)定要求比較高

不知道你的酶怎么提取的，最好用超高速離心機(jī)，大樣本提取。

你用的是器官還是整個(gè)試材？這些都有影響。

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19樓2012-12-04 20:59:57

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sszzpp4樓

2012-09-10 09:42 回復(fù)

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wuzezhou5樓

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vaoing9樓

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yingying158813樓

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jiaoyuanming14樓

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gyfwon16樓

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