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wujibifan新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助-基因的突變文庫相關(guān)問題 已有1人參與
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給位大俠，小弟最近在構(gòu)建一個(gè)基因的突變文庫，具體流程是：先克隆該基因，連到一個(gè)穿梭載體上，測(cè)序確定該基因后，進(jìn)行易錯(cuò)PCR，來得到該基因的突變體，然后和之前同樣的載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)而構(gòu)建突變文庫。 現(xiàn)遇到的問題：轉(zhuǎn)化率太低，每次轉(zhuǎn)化就長(zhǎng)幾個(gè)菌，導(dǎo)致文庫的容量不夠，沒有代筆性。 求助：請(qǐng)各位大俠幫幫我，我該在那些地方改進(jìn)呢？我已驗(yàn)證酶切效果很好，轉(zhuǎn)化過程中設(shè)置了陽性對(duì)照，轉(zhuǎn)化也很好，估計(jì)是連接過程出問題？目的片段與載體的摩爾比很重要嗎？用哪個(gè)公司的連接酶效果會(huì)好些？我用過TAKARA，Promega的，效果都差不多。緩沖液失效了？ [ Last edited by 1949stone on 2012-9-13 at 07:43 ] |
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墨香若水
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