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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看

Marado

金蟲 (正式寫手)

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9樓: Originally posted by zhaoxiaoming at 2012-09-19 11:07:23
"3.上清無目的蛋白，無酶活，這個(gè)與文獻(xiàn)相符.
4.細(xì)胞破碎后，上清有目的蛋白"?
這個(gè)是什么情況，怎么破碎后就有酶活了?低溫，低轉(zhuǎn)速誘導(dǎo)蛋白會正確折疊率高，上清蛋白會高些；破碎后無法澄清，有白色 ...

這個(gè)酶是胞內(nèi)酶，在原始菌中也是胞內(nèi)的，文獻(xiàn)中也是破碎細(xì)胞后用細(xì)胞萃取物（破碎細(xì)胞后的上清液）測定酶活的.

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11樓2012-09-19 11:11:22

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Marado

金蟲 (正式寫手)

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引用回帖:

10樓: Originally posted by tupac225 at 2012-09-19 11:08:04
破碎后一直都無法澄清，還是包涵體過多的原因，白色的沉淀里會有大量的蛋白。...

即使有包涵體，那么我破碎細(xì)胞后的上清中也有部分可溶性的目的蛋白的，而且酶活測定也說明有，怎么就掛不上柱子呢？

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12樓2012-09-19 11:12:42

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tupac225

金蟲 (正式寫手)

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引用回帖:

6樓: Originally posted by Marado at 2012-09-19 10:39:34
謝謝你，這個(gè)有一個(gè)問題，我蛋白表達(dá)出來了，而且測了確實(shí)有酶活，這可不可以說明折疊正確有活性呢？...

我說的是純化后，你的蛋白可能折疊的不正確，純化前是有活性的。

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Marado

coasttocoast。

13樓2012-09-19 11:13:06

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Marado

金蟲 (正式寫手)

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引用回帖:

13樓: Originally posted by tupac225 at 2012-09-19 11:13:06
我說的是純化后，你的蛋白可能折疊的不正確，純化前是有活性的。...

純化后蛋白折疊的不正確？純化過程會影響蛋白折疊麼？
純化前有活性，是否說明折疊正確？
不好意思，這方面確實(shí)不太懂，望不吝賜教

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14樓2012-09-19 11:21:20

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tupac225

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

12樓: Originally posted by Marado at 2012-09-19 11:12:42
即使有包涵體，那么我破碎細(xì)胞后的上清中也有部分可溶性的目的蛋白的，而且酶活測定也說明有，怎么就掛不上柱子呢？...

不知道你過的什么柱子？

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coasttocoast。

15樓2012-09-19 11:33:59

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ynkuaile

木蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

其他人給的建議都很好，我說一句我自己擔(dān)心的，樓主用的細(xì)胞裂解液測酶活，這是個(gè)很雜的體系，不知樓主的底物是什么，怕有同工酶或底物沒那么專一性的酶的影響。再沒有純化出酶之前，樓主要測活，最好做個(gè)不過量表達(dá)的普通菌做對照，這樣就會知道是其他蛋白的干擾還是真正自己的酶活。GST的標(biāo)簽比較大，掛柱子還是很容易的。純化時(shí)多了解酶的性質(zhì)，選合適溶液。祝樓主順利

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16樓2012-09-19 16:31:59

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timmychina

鐵桿木蟲 (正式寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

pGEX表達(dá)系統(tǒng)，我以前做過，37℃誘導(dǎo)是可以的但是需要蛋白復(fù)性。我們都是26℃，稍微延長誘導(dǎo)時(shí)間。但是即使再怎么優(yōu)化條件，GST標(biāo)簽仍然會表達(dá)很多。

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彩云之南的愿望還能實(shí)現(xiàn)嗎

17樓2012-09-21 07:40:52

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Marado

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17樓: Originally posted by timmychina at 2012-09-21 07:40:52
pGEX表達(dá)系統(tǒng)，我以前做過，37℃誘導(dǎo)是可以的但是需要蛋白復(fù)性。我們都是26℃，稍微延長誘導(dǎo)時(shí)間。但是即使再怎么優(yōu)化條件，GST標(biāo)簽仍然會表達(dá)很多。

謝謝，我今天決定先做個(gè)28攝氏度看看！

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18樓2012-09-21 10:08:50

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16樓: Originally posted by ynkuaile at 2012-09-19 16:31:59
其他人給的建議都很好，我說一句我自己擔(dān)心的，樓主用的細(xì)胞裂解液測酶活，這是個(gè)很雜的體系，不知樓主的底物是什么，怕有同工酶或底物沒那么專一性的酶的影響。再沒有純化出酶之前，樓主要測活，最好做個(gè)不過量表達(dá) ...

底物是海藻酸鈉，能夠降解這個(gè)的菌很少，大腸桿菌之類的普通菌是肯定不行的……不過安全起見，我已經(jīng)做了一批普通菌出來了，準(zhǔn)備用來作對照.謝謝提醒！

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19樓2012-09-21 10:10:04

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15樓: Originally posted by tupac225 at 2012-09-19 11:33:59
不知道你過的什么柱子？...

是康為世紀(jì)的GST瓊脂糖凝膠，型號是CW0190，買了有快一年了，之前別人做過幾次別的蛋白，然后我再生柱子后做的.

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20樓2012-09-21 10:12:01

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