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rainbow8

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[交流] 酵母氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型的驗(yàn)證問(wèn)題

大家好，我做ura缺陷的酵母菌，該酵母Leu ura合成的基因被敲掉了，ura導(dǎo)入質(zhì)粒后，在ura缺陷的平板上長(zhǎng)出來(lái)單菌落，挑單菌落放液體培養(yǎng)驗(yàn)證，培養(yǎng)基同樣是缺ura的，對(duì)照設(shè)既不加ura也不加leu，結(jié)果是不加ura的管生長(zhǎng)，不加leu和ura的不長(zhǎng)（同一個(gè)單菌落），這能證明質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)到酵母里面了嗎？還有必要再提酵母質(zhì)�；蚧蚪M或pcr驗(yàn)證嗎？請(qǐng)大家?guī)臀曳治龇治觯x謝！

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1樓 2012-09-27 13:40:59

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blackdogzmz

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不懂,幫頂一下,請(qǐng)別人來(lái)答吧.....

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2樓2012-09-27 14:26:43

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dshlove

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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既然是ura缺陷的酵母菌，為什么在ura缺陷的平板上長(zhǎng)出來(lái)單菌落？

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3樓2012-09-27 16:45:17

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houchm0927

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-09-28 14:40:40

做過(guò)Y2H。個(gè)人感覺(jué)這樣就可以了。我做的話(huà)，用未轉(zhuǎn)化yeast用單缺-ura不生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化yeast用單缺-ura生長(zhǎng)。就可以了。我當(dāng)時(shí)做的時(shí)候轉(zhuǎn)化結(jié)果會(huì)用菌液pcr檢測(cè)的，結(jié)果證明可以。其實(shí)，看一下單缺板上酵母的形態(tài)良好基本上就是轉(zhuǎn)化成功菌株。個(gè)人意見(jiàn)！

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4樓2012-09-27 20:50:49

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susizheng

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如果你確定用的是Drop-out medium，應(yīng)該是沒(méi)有什么問(wèn)題的，缺陷型篩選是比較準(zhǔn)確的，相對(duì)抗性篩選來(lái)說(shuō)。

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6樓2012-09-28 09:24:36

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daisy143

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7樓2012-09-28 09:54:16

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wt3532

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不知道你的酵母是不是二倍體的，如果是還要先分離單倍體
理論上講對(duì)照應(yīng)該都不長(zhǎng)才對(duì)啊

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8樓2012-09-29 08:48:33

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yingying15885樓

2012-09-27 21:10 回復(fù)

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祝福~

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