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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
cDNA文庫構(gòu)建lambda dilution buffer的配制
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大家好！我最近要建一個(gè)cDNA文庫，選用的是Clontech的SMART cDNA Library Construction Kit，要求自己配制10×lambda dilution buffer和1×lambda dilution buffer。我要配制1M Tris-HCl （pH 7.5），實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在有Tris hydrochloride固體，瓶子上標(biāo)有pH(0.1M)為3.5-5.0，這要怎么配制��？此外，還有2% Gelatin，這里的2%是還是質(zhì)量體積比嗎？具體要怎么配制呢？請各位幫個(gè)忙，謝謝！ 附：已知配方為： 10× Lambda dilution buffer 終濃度 配制1L溶液需要量 NaCl 1.0 M 58.3 g MgSO4•7H2O 0.1 M 24.65 g Tris-HCl （pH 7.5） 0.35 M 350.0 ml of 1 M 加H2O到終體積為1L。高壓滅菌，4℃保存。 1× Lambda dilution buffer 100 ml 10× Lambda dilution buffer 5 ml 2% Gelatin（0.01%終濃度） 加H2O到終體積為1L。高壓滅菌，4℃保存。 |
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bohr86
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5樓2012-10-06 22:32:49
bohr86
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
小丹木木: 金幣+4, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-07 17:24:07
小丹木木: 金幣+4, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-07 17:24:07
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第一個(gè)問題：我覺得你還是不要用Tris hydrochloride 來配置Tris 緩沖溶液，里面的HCl比較多，配出來會(huì)偏酸性，調(diào)堿一般有兩種方法：添加Tris base ，但會(huì)增加緩沖溶液的濃度；用NaOH調(diào)又會(huì)帶入新的離子，可能會(huì)對下面實(shí)驗(yàn)有影響。為什么不直接用Tris base 配呢？ 第二個(gè)問題：2%的Gelatin一般只的是w/v濃度. |
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含羞草liu2樓2012-10-05 23:03:26
含羞草liu
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3樓2012-10-06 09:25:25
含羞草liu
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4樓2012-10-06 10:02:55
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