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review銀蟲 (著名寫手)
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[交流]
克隆時做酶切，只切載體還是連要插入載體的片段也要酶切呢？ 已有5人參與
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我的實(shí)驗(yàn)：擴(kuò)增獲得片段后連在載體上，再轉(zhuǎn)到大腸桿菌里。 片段與載體連接時，是不是先給載體做個酶切？片段也要做嗎 片段已經(jīng)加A了 |
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gwd0312
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小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56
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小丹木木: 金幣+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56
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引物設(shè)計(jì)原則： 1 引物長度大于16bp,一般為20-24個核苷酸 2 引物與靶序列間的Tm值不應(yīng)過低 3 引物不應(yīng)有發(fā)夾結(jié)構(gòu)。即不能有4bp以上的回文序列 4 兩引物間不應(yīng)有大于4pb以上的互補(bǔ)序列或同源序列，在3’端不應(yīng)有任何互補(bǔ)堿基 5 引物中堿基的分布盡可能均勻，G+C含量接近50% 此外，你如果要加入酶切位點(diǎn)還要考慮酶切位點(diǎn)的選擇啊。 1 盡量不要選擇載體上面的酶； 2 盡量選擇常見、經(jīng)濟(jì)的酶； 3 選擇多個酶時要保證有合適的共用bufer。 |
6樓2012-10-10 18:48:43
gwd0312
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4樓2012-10-10 17:19:42
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5樓2012-10-10 17:28:18
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7樓2012-10-10 21:18:30
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8樓2012-10-10 22:17:31
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