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[求助] 測(cè)定提取總RNA濃度

大家好！請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題，提取總RNA后，大家一般用DEPC水稀釋多少倍測(cè)吸收，使用的儀器是紫外吸收嗎？池子是白色兩面透光的石英池嗎？本來(lái)我提取的量很少，這樣會(huì)不會(huì)損失太多。

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1樓 2012-10-11 18:58:35

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bbwalkman

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我一般就是取10uL到60uL體系，測(cè)260和280；做轉(zhuǎn)錄的時(shí)候也用過(guò)5uL到100uL體系的，用于測(cè)量的我一般就不用了。稀釋的話(huà)還要看你提的量的多少，一般池子的最小體積就是60uL。

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2樓2012-10-11 22:12:18

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starseacow

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以前用島津UV2401PC，石英比色皿，2微升樣品加998微升水，測(cè)出結(jié)果在要求不是很?chē)?yán)苛的情況下可以使用�，F(xiàn)在用NANODROP，一微升樣品就夠了。

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植物生理群69993869，為避免廣告，申請(qǐng)加入請(qǐng)?zhí)峁┠鞠x(chóng)昵稱(chēng)，院校及專(zhuān)業(yè)信息

3樓2012-10-12 04:39:19

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gaoyang636

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821078607: 金幣+2, ★有幫助, 謝謝了 2012-10-14 22:36:46

用Nanodrop (Thermo) 測(cè)濃度，一次1ul即可；如果濃度很低(<10ng/ul)，Nanodrop可能測(cè)不準(zhǔn)，就用Qubit (invitrogen) 吧，也是一次1-2ul

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4樓2012-10-12 08:30:14

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2樓: Originally posted by bbwalkman at 2012-10-11 22:12:18
我一般就是取10uL到60uL體系，測(cè)260和280；做轉(zhuǎn)錄的時(shí)候也用過(guò)5uL到100uL體系的，用于測(cè)量的我一般就不用了。稀釋的話(huà)還要看你提的量的多少，一般池子的最小體積就是60uL。

你用這么小的池子，那計(jì)算公式還是使用的OD260*40*稀釋倍數(shù)嗎？因?yàn)槿芤簼舛认嗤瑫r(shí)，用不同池子測(cè)出的OD值會(huì)不一樣的

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5樓2012-10-12 09:17:32

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 821078607 at 2012-10-12 09:17:32
你用這么小的池子，那計(jì)算公式還是使用的OD260*40*稀釋倍數(shù)嗎？因?yàn)槿芤簼舛认嗤瑫r(shí)，用不同池子測(cè)出的OD值會(huì)不一樣的...

恩恩我們這一直用這么小的池子，每次我測(cè)的時(shí)候都是用一個(gè)池子，盡量保持一致啊。

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6樓2012-10-13 11:08:46

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6樓: Originally posted by bbwalkman at 2012-10-13 11:08:46
恩恩我們這一直用這么小的池子，每次我測(cè)的時(shí)候都是用一個(gè)池子，盡量保持一致啊。...

我想請(qǐng)教一下那你用什么公式計(jì)算的濃度啊，謝謝！

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7樓2012-10-13 16:44:48

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7樓: Originally posted by 821078607 at 2012-10-13 16:44:48
我想請(qǐng)教一下那你用什么公式計(jì)算的濃度啊，謝謝！...

就是你之前寫(xiě)的這個(gè)公式大致計(jì)算一下RNA的濃度呢，

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8樓2012-10-13 17:19:40

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