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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調劑公告
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380218013

金蟲 (小有名氣)

[交流] 感受態(tài)轉化

最近小弟做感受態(tài)轉化實驗。結果發(fā)現(xiàn)空的感受態(tài)在AMP平板也長菌落。AMP平板式100毫升+100微升AMP（100毫克每毫升），這樣終濃度是100微克每毫升。有木有人有同樣的經(jīng)歷和解決辦法啊 ？？？
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joan198108

鐵桿木蟲 (正式寫手)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
氨芐只是抑菌，并且一般認為超過18h氨芐失效，所以如果空的感受態(tài)細胞培養(yǎng)時間太長并且密度很大的情況下也可能會長
8樓2012-10-13 16:56:55
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frcheng

新蟲 (初入文壇)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
建議熱激42s試試
20樓2012-10-14 08:50:45
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馬兒快跑

新蟲 (初入文壇)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
42度熱激45秒就夠了  我們是這樣做的  效果很好的，像你種情況樓上各位已經(jīng)分析的很透徹了，一是感受態(tài)被污染或突變了，一個是抗生素失效了！你可以再重復一次！
27樓2012-10-16 15:23:39
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普通回帖

seraph09

新蟲 (初入文壇)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
你得感受態(tài)是買的還是自己做的？能不能詳細說明你得轉化步驟？
2樓2012-10-13 09:17:17
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j2

木蟲 (正式寫手)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
AMP是否有效？感受態(tài)是自制還是購買？
3樓2012-10-13 09:30:57
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cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
★ ★ ★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-10-13 16:28:05
如果是購買的感受態(tài)細胞，應該不能在氨芐板上長，有可能是抗生素部分失效，或者是到平板是培養(yǎng)基太熱。氨芐對溫度比較敏感，到板時要讓培養(yǎng)基溫度冷卻到50度以下再加抗生素。
如果自制的感受態(tài)，有可能是做感受態(tài)過程中有污染。
4樓2012-10-13 09:45:36
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wolvesdancer

鐵桿木蟲 (正式寫手)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
空載的菌本來就能長，可以做藍白斑篩選確定陽性轉化子
5樓2012-10-13 10:23:23
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daisy143

至尊木蟲 (著名寫手)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
幫頂
7樓2012-10-13 12:30:32
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gwd0312

木蟲 (正式寫手)
★
380218013(金幣+1): 謝謝參與
建議做個藍白斑篩選！
9樓2012-10-13 17:15:23
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
2樓: Originally posted by seraph09 at 2012-10-13 09:17:17
你得感受態(tài)是買的還是自己做的？能不能詳細說明你得轉化步驟？

買的感受態(tài)。步驟質粒50ng加50ul感受態(tài) 冰上30min 42°熱激 90s 冰上三分鐘。加200ul 無AMP培養(yǎng)基擴增30min，涂布平板。過夜。
10樓2012-10-13 19:57:35
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
3樓: Originally posted by j2 at 2012-10-13 09:30:57
AMP是否有效？感受態(tài)是自制還是購買？

我第一次也以為是AMP失效  新配的 還是長的 。感受態(tài)是買的
11樓2012-10-13 19:58:15
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
4樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-13 09:45:36
如果是購買的感受態(tài)細胞，應該不能在氨芐板上長，有可能是抗生素部分失效，或者是到平板是培養(yǎng)基太熱。氨芐對溫度比較敏感，到板時要讓培養(yǎng)基溫度冷卻到50度以下再加抗生素。
如果自制的感受態(tài)，有可能是做感受態(tài)過 ...

AMP 是先配的  加的溫度注意了，手可以握著瓶子的時候加的AMP 應該不是溫度的原因。
12樓2012-10-13 19:59:29
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
5樓: Originally posted by wolvesdancer at 2012-10-13 10:23:23
空載的菌本來就能長，可以做藍白斑篩選確定陽性轉化子

其實我也想知道空載的菌是不是可以長的。。你這么肯定的話 我心理就有數(shù)了
13樓2012-10-13 20:00:23
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
8樓: Originally posted by joan198108 at 2012-10-13 16:56:55
氨芐只是抑菌，并且一般認為超過18h氨芐失效，所以如果空的感受態(tài)細胞培養(yǎng)時間太長并且密度很大的情況下也可能會長

就是說空載的感受態(tài)本身是可以再AMP上長的是嗎？？我是涂布之后過夜的  肯定過18h了
14樓2012-10-13 20:01:28
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
9樓: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-13 17:15:23
建議做個藍白斑篩選！

能否給個步驟啊 大蝦。沒有做過呢
15樓2012-10-13 20:02:20
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wolvesdancer

鐵桿木蟲 (正式寫手)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
引用回帖:
13樓: Originally posted by 380218013 at 2012-10-13 20:00:23
其實我也想知道空載的菌是不是可以長的。。你這么肯定的話 我心理就有數(shù)了...

你的問題沒說太詳細，具體用的什么載體？
如果Amp抗性是載體上的，那空載的菌長出來很正常啊，不長才不正常
18樓2012-10-13 23:35:39
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cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
引用回帖:
14樓: Originally posted by 380218013 at 2012-10-13 20:01:28
就是說空載的感受態(tài)本身是可以再AMP上長的是嗎？？我是涂布之后過夜的  肯定過18h了...

你的空對照是加了空載體，還是直接用感受態(tài)細胞做的呀？什么都不加或者加水做的空對照不能在氨芐板上長。如果是查看載體自連的情況用沒加插入片段的空載體做的對照是可以在抗性板上長的。至于時間過長而導致氨芐失效的問題要看你空板上的菌落大小，是否和轉化了連接產物的一樣呢？
19樓2012-10-14 01:17:19
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
19樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-14 01:17:19
你的空對照是加了空載體，還是直接用感受態(tài)細胞做的呀？什么都不加或者加水做的空對照不能在氨芐板上長。如果是查看載體自連的情況用沒加插入片段的空載體做的對照是可以在抗性板上長的。至于時間過長而導致氨芐失 ...

直接感受態(tài)涂布的   菌落大小稍微比轉質粒的大一點。
21樓2012-10-14 09:52:05
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
18樓: Originally posted by wolvesdancer at 2012-10-13 23:35:39
你的問題沒說太詳細，具體用的什么載體？
如果Amp抗性是載體上的，那空載的菌長出來很正常啊，不長才不正常...

PGL sv40載體 是AMP抗性的 現(xiàn)在問題是我只用感受態(tài)，不轉化，涂布AMP也長了很多菌落
22樓2012-10-14 09:55:12
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380218013

金蟲 (小有名氣)
引用回帖:
20樓: Originally posted by frcheng at 2012-10-14 08:50:45
建議熱激42s試試

大哥 可以嗎
23樓2012-10-14 09:55:27
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cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
★
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引用回帖:
21樓: Originally posted by 380218013 at 2012-10-14 09:52:05
直接感受態(tài)涂布的   菌落大小稍微比轉質粒的大一點。...

如果氨芐的板沒問題的話，檢查復蘇是所加LB是否污染。還有可以你挑幾個菌落在液體LB+AMP培養(yǎng)過夜看看是不是正常。
24樓2012-10-14 14:58:52
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damaomao

禁蟲 (正式寫手)
★
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25樓2012-10-15 13:26:37
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hzlatqh

銀蟲 (小有名氣)
就是amp平板失效了。。。
26樓2012-10-16 00:05:18
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寂寞又美好

金蟲 (小有名氣)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
極有可能是AMP失效了，因為這個我就出現(xiàn)過這種情況百思不得其解，最后終于找到了原因，建議重新買一瓶配好的AMP，如果買到的是固體粉末一定要用細菌濾器過濾，要嚴格按照無菌操作
28樓2012-10-16 16:14:21
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簡單回復
flyxu6樓
2012-10-13 10:46   回復  
380218013(金幣+1): 謝謝參與
chenzhana16樓
2012-10-13 20:30   回復  
380218013(金幣+1): 謝謝參與
chenruia17樓
2012-10-13 20:41   回復  
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