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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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sxxuan

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[求助] 菌株復(fù)蘇失敗是怎么回事？

實(shí)驗(yàn)室一直以來(lái)做了很多T克隆，克隆正確的菌株以甘油凍存，一般是700ul菌液+300ul滅菌甘油，混勻后-80℃凍存。以前一直都沒(méi)有問(wèn)題的，最近這兩三個(gè)月復(fù)蘇菌株總會(huì)出現(xiàn)復(fù)蘇不成功，或者要搖多幾個(gè)小時(shí)才出現(xiàn)渾濁的情況，請(qǐng)問(wèn)會(huì)在哪方面出問(wèn)題了？甚至是國(guó)慶前保存的菌株，放完假回來(lái)復(fù)蘇都不成功
有人說(shuō)是不是感受態(tài)效率不高導(dǎo)致后面的搖菌都不成功，會(huì)是這樣嗎？

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1樓 2012-10-19 13:59:25

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
sxxuan: 金幣+3, ★有幫助 2012-10-20 14:42:01

菌種保存在10%甘油中。最多不要超過(guò)20%。復(fù)蘇時(shí)要是結(jié)果不理想，先把菌液劃板，再挑再搖

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2樓2012-10-19 15:10:12

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3樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 12:03:43
反復(fù)凍化不好。把凍存的菌種從-80拿出來(lái)，不要化掉，用無(wú)菌牙簽或者接種環(huán)刮幾下劃板。把菌迅速放回-80. 直接從凍存搖的細(xì)菌活力差，而且多余的甘油對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)不利，經(jīng)劃板的菌株活力好，可以挑菌搖菌提質(zhì)�；蛘咦霰� ...

謝謝，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一棟樓，來(lái)回拿都有點(diǎn)距離，謝謝

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4樓2012-10-20 14:40:28

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cicelyzh

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sxxuan: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-10-20 14:40:46

反復(fù)凍化不好。把凍存的菌種從-80拿出來(lái)，不要化掉，用無(wú)菌牙簽或者接種環(huán)刮幾下劃板。把菌迅速放回-80. 直接從凍存搖的細(xì)菌活力差，而且多余的甘油對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)不利，經(jīng)劃板的菌株活力好，可以挑菌搖菌提質(zhì)�；蛘咦霰磉_(dá)用。

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3樓2012-10-20 12:03:43

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2樓: Originally posted by jinfangli at 2012-10-19 15:10:12
菌種保存在10%甘油中。最多不要超過(guò)20%。復(fù)蘇時(shí)要是結(jié)果不理想，先把菌液劃板，再挑再搖

如果超過(guò)20%就不穩(wěn)定了嗎？我后來(lái)改用了10%的甘油都有出現(xiàn)這樣的情況，是怎么回事了？而且是凍存都第一次拿出來(lái)用而已，才隔了一周的時(shí)間

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5樓2012-10-20 14:41:53

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sxxuan: 金幣+2, ★有幫助 2012-10-22 16:37:06

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5樓: Originally posted by sxxuan at 2012-10-20 14:41:53
如果超過(guò)20%就不穩(wěn)定了嗎？我后來(lái)改用了10%的甘油都有出現(xiàn)這樣的情況，是怎么回事了？而且是凍存都第一次拿出來(lái)用而已，才隔了一周的時(shí)間...

你保的菌種應(yīng)該是活性比較好的階段，保種時(shí)要注意無(wú)菌操作，我們這邊還沒(méi)出現(xiàn)這種情況，最好拿菌劃板，重新挑菌

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6樓2012-10-20 14:54:20

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4樓: Originally posted by sxxuan at 2012-10-20 14:40:28
謝謝，如果是放在冰上操作如何？由于-80冰箱放在另一棟樓，來(lái)回拿都有點(diǎn)距離，謝謝...

我的意思是盡量不要凍化保藏菌種。其實(shí)一般的細(xì)菌是很皮實(shí)的，化過(guò)幾次應(yīng)該還能復(fù)蘇。如果冰箱和實(shí)驗(yàn)室距離遠(yuǎn)也沒(méi)辦法了。就冰上操作比室溫下強(qiáng)。你的甘油放了不少，直接搖菌可能會(huì)抑制菌的生長(zhǎng)，先劃板是比較好。

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7樓2012-10-21 02:20:04

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6樓: Originally posted by jinfangli at 2012-10-20 14:54:20
你保的菌種應(yīng)該是活性比較好的階段，保種時(shí)要注意無(wú)菌操作，我們這邊還沒(méi)出現(xiàn)這種情況，最好拿菌劃板，重新挑菌...

一般都是過(guò)夜搖菌第二天保菌的，大概搖16h，是不是太過(guò)了？

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8樓2012-10-21 20:25:28

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7樓: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-21 02:20:04
我的意思是盡量不要凍化保藏菌種。其實(shí)一般的細(xì)菌是很皮實(shí)的，化過(guò)幾次應(yīng)該還能復(fù)蘇。如果冰箱和實(shí)驗(yàn)室距離遠(yuǎn)也沒(méi)辦法了。就冰上操作比室溫下強(qiáng)。你的甘油放了不少，直接搖菌可能會(huì)抑制菌的生長(zhǎng)，先劃板是比較好。...

10%的甘油呢？會(huì)不會(huì)影響？

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9樓2012-10-21 20:25:57

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引用回帖:

9樓: Originally posted by sxxuan at 2012-10-21 20:25:57
10%的甘油呢？會(huì)不會(huì)影響？...

我做菌種保藏甘油的濃度是15%。說(shuō)是抑制，多數(shù)情況下也可以長(zhǎng)，就是長(zhǎng)得不好，不好用。所以總是先劃下板再搖。多一個(gè)晚上在板上復(fù)蘇一下也沒(méi)什么大不了的吧。

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10樓2012-10-21 23:29:53

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