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shenxing325銅蟲(chóng) (小有名氣)
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請(qǐng)問(wèn)pET30b這個(gè)載體在IPTG誘導(dǎo)后有沒(méi)有可能表達(dá)除了目的蛋白以外的其他蛋白？
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| 用pET30b表達(dá)一個(gè)蛋白，誘導(dǎo)前后有很明顯的蛋白表達(dá)條帶。但是做Western做了三次了，都沒(méi)有特異性條帶，而且蛋白在37度誘導(dǎo)條件下竟然完全在可溶組分里面，所以我很懷疑是不是我的目的蛋白。但是除了118KD的半乳糖苷酶以外，PET系統(tǒng)應(yīng)該不會(huì)表達(dá)除了目的蛋白以外的其他蛋白了吧？ |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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shenxing325: 金幣+3, ★有幫助 2012-10-22 09:57:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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沒(méi)遇到過(guò)這種情況。37度誘導(dǎo)可溶也不一定有問(wèn)題，是否可溶和蛋白有關(guān)。 首先確定表達(dá)載體做得沒(méi)問(wèn)題。誘導(dǎo)的蛋白分子量對(duì)不對(duì)？能用標(biāo)簽純化出來(lái)嗎？此外，你可以做一個(gè)空載體誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后的對(duì)照，看看有沒(méi)有非特異誘導(dǎo)。 |
2樓2012-10-22 00:31:24
linxt2005
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4樓2012-10-22 09:57:44
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6樓2012-10-22 11:34:54
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。我打算先試試上柱，看看行不行，要不也不行那就悲劇了
。就只能去打譜了 7樓2012-10-22 12:15:16
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10樓2012-10-22 15:50:16
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