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minmin-911銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
HPLC 用C18反相柱鑒定蛋白純度，蛋白峰與溶劑峰混在一起怎么辦？
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HPLC條件： HPLC柱子：C18, 4.6 mm × 250 mm, 300 Å 洗脫液A [0.1% 三氟乙酸水溶液] 洗脫液 B (0.1% 三氟乙酸乙腈溶液) 30min 線性洗脫 100%A 5%B 到70%A 30%B 流速為 1.0 ml/min 檢測波長為：280 nm 目標蛋白分子量為25KDa, pI為5左右。 如圖所示，是不是我的目標蛋白的極性太強，導致與溶劑峰出峰太早，我可以用甲醇替代乙腈，乙酸替換三氟乙酸嗎？或者怎樣調節(jié)我的流動相與洗脫條件，讓我的目的蛋白出峰晚些？在樣品中添加多少濃度的鹽溶液，是否也可以讓出峰晚些？ 1.jpg 2.jpg |
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