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catmihzh木蟲 (小有名氣)
蟲蟲特攻隊隊長
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[求助]
單酶切兩條帶？
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| 我將一個1600左右的片段連接到4100左右的質(zhì)粒上，轉(zhuǎn)化后挑了四個克隆，其中兩個提質(zhì)粒用HindIII單酶切居然出現(xiàn)兩個條帶，用EcoRI和SalI分別單酶切也是完全一樣的情況，請問這可能是什么原因？ 酶切電泳圖如文件（第1、4泳道是質(zhì)粒用HindIII單酶切，上面一條帶是4100左右，下面一條帶是3000左右，第5、8泳道是對應(yīng)的未酶切的質(zhì)粒） |
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2012-10-24 14:56:11, 3.81 M
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3樓2012-10-24 16:37:00
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1、還在下載圖像的過程中，先推測一下：可能接頭產(chǎn)生相應(yīng)的酶切位點了；將你的片段與插入序列連接后用軟件分析一下，看看是否有2個切點； 2、圖像仍在下載中（樓主，以后為了大家?guī)兔δ軌虮M快看到結(jié)果，請把圖像處理好，保持幾十k就行了，圖像一點點就可以）。 3、 1/4單酶切，兩條相加超過7k，你的是5.7k，不對頭。2/3是啥？？與1/4的上頭的一樣大。（切開的非目的重組片段？） 4、 請修改問題，將酶切體系用量、時間等寫清楚，每個泳道是啥？說清楚大家才能幫你找原因哈。 5、 手持相機(jī)拍照可在前面加一塊550-580nm帶通濾光片。 |
4樓2012-10-24 16:45:47
catmihzh
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6樓2012-10-24 19:43:01
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