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[交流]
大家來說說做southern blot時，基因組DNA的提取方法
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| 做southern blot，對基因組DNA質(zhì)量要求很高...希望大家一起交流下...我現(xiàn)在用CTAB法提取出來的DNA的質(zhì)量還行，就是到酶切的時候基本都要切上24小時以上...希望大家多提意見！謝謝！ |
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3樓2012-10-31 16:48:13
4樓2012-11-03 13:06:19
blackrose8089
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DNA抽提緩沖液（lysis buffer）：50mM Tris-Hcl（Ph7.2） 50mM EDTA 3% SDS 1% β-巰基乙醇（用時加） 飽和酚：氯仿（V：V,1：1） 異丙醇 3M醋酸鈉NaOAc（Ph8.0） 1． 稱取0.075－0.085g干菌絲置于預(yù)冷的研缽中，加入液氮研磨至細(xì)粉末狀，迅速轉(zhuǎn)至1.5ml的離心管中并加入750μl DNA提取緩沖液（65℃預(yù)熱），在振蕩器上振蕩幾秒鐘充分混勻，然后放到65℃水浴鍋中水浴60min，每10min搖動一次。 2． 加入750μl飽和酚：氯仿（V：V,1：1）輕輕顛倒離心管數(shù)次充分混勻，室溫下12000rpm離心15min，取上清液置于新的離心管中。 3． 加入1/30體積的3M醋酸鈉NaOAc（PH8.0）和0.54體積的異丙醇，輕輕混勻后置于4℃冰箱中30min，室溫下12000rpm離心2min，小心倒掉上清液，然后用冷的70％乙醇洗滌沉淀兩次（輕輕顛倒離心管若干次），倒掉乙醇。 4． 將裝有DNA沉淀的離心管置于真空干燥器中，干燥約30min（時間以DNA變干為準(zhǔn)）。 5． 加入500μl的ddH2O溶解DNA沉淀，同時加入1－2μl RNase（終濃度為20μg/ml）,37水浴60min。 6． 加入等體積的飽和酚：氯仿（V：V,1：1），充分混勻，然后室溫下12000rpm離心15min，取上清液置于新的離心管中。 7． 重復(fù)步驟3。 8． 重復(fù)步驟4。 9． 加入100ml TE溶解DNA，待完全溶解后置于－20℃冰箱中備用。 |
13樓2012-11-04 15:46:14
14樓2012-11-05 07:54:09
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15樓2012-11-05 14:53:04
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17樓2012-11-06 09:10:52
18樓2012-11-06 12:22:41
19樓2012-11-06 14:21:21
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21樓2012-11-06 16:45:21
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