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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙鏈cDNA條帶檢測(cè)
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大家好！我剛做了LD-PCR擴(kuò)增出雙鏈cDNA，用Thermo Scientific GeneRuler 1kb DNA ladder進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可以看到拖帶，但是DNA ladder沒(méi)有跑出全部條帶，拖帶不知大小范圍。我做得是1.1%瓊脂糖凝膠，電泳條件為50V，70min。我個(gè)人感覺，樣3和樣4的條帶較好，樣1的拖帶不清晰，樣2的條帶也不太好，不知大家怎么看。此外，我想請(qǐng)教大家，大范圍的Marker要什么樣的電泳條件才能跑全條帶呢？ 雙鏈cDNA電泳圖.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-11-02 13:46:12
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個(gè)人建議，僅供參考！ 1.0%瓊脂糖膠（1 X TAE或0.5 X TBE），100V，由于配膠的模具不同，建議跑到前沿指示劑（溴酚藍(lán)）至膠的2/3---4/5就可以了。個(gè)人感覺TBE跑出的結(jié)果好一點(diǎn)。而且低離子強(qiáng)度電流不會(huì)很大，電泳液發(fā)熱不明顯，對(duì)DNA和EB的降解作用都會(huì)弱很多。 樣2的條帶也不錯(cuò)，swear的很正常，大片段的也較多。 |
4樓2012-11-02 10:15:11
含羞草liu
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5樓2012-11-02 14:36:49
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6樓2012-11-03 11:19:35
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含羞草liu9樓2012-11-04 09:19:09
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