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[交流]
BP clonase II enzyme mix 多克隆連接 已有5人參與
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| 誰(shuí)用BP clonase II enzyme mix做過(guò)多克隆連接，我連接了兩個(gè)月了還是連不上不知道什么原因，蟲(chóng)友們幫幫我，萬(wàn)分感謝！ |
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starseacow
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7樓2012-11-09 03:20:49
stone2239
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2樓2012-11-05 12:49:19
starseacow
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3樓2012-11-06 04:06:37
amisking: 回帖置頂 2012-11-08 20:23:44
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你好，非常感謝你的回復(fù)，我的B位點(diǎn)DNA片段大概是4kb，我用的5ulBP反應(yīng)體系，B位點(diǎn)DNA片段的濃度和用量為1ul,20-60ng/ul.不知道用量是否有點(diǎn)少，連接時(shí)間為16h,l連接產(chǎn)物取1ul熱擊法轉(zhuǎn)入50ulDH5α感受態(tài)中，最終平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)只有幾個(gè)檢測(cè)也不是目的entry clone，不知道我上面的操作方法有沒(méi)有什么問(wèn)題還請(qǐng)你指出，我現(xiàn)在想嘗試一下電擊轉(zhuǎn)化，因?yàn)槲矣X(jué)得問(wèn)題可能在轉(zhuǎn)化上了。還請(qǐng)你給出意見(jiàn)和建議。 |
4樓2012-11-08 11:07:40
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