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海之精靈89新蟲 (小有名氣)
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[求助]
大片段連接
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一個(gè)片段連接了三個(gè)月了，快崩潰了，開始連不上后來連上測序失敗。 本人用鴨肝炎的全長分為兩部分連接到PCDNA3.1Zeo(+) 連接的第一段3700，一次就連接上了而且測序目的片段和載體均正確； 連接第二段4000，開始連接不上，后來連接上，但測序無信號(hào)，再后來想辦法設(shè)計(jì)引物測序，發(fā)現(xiàn)目的片段已經(jīng)連接上且正確，但是載體不知為什么錯(cuò)了？ 后來用改進(jìn)的方法直接將鴨肝炎的ORF連接到改造的pCDNA上，用不同的引物進(jìn)行PCR，全長都擴(kuò)出來了，測序失敗不知為什么？ 請高人指點(diǎn)，或者有遇到類似情況的蟲友幫忙？ |
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2樓2012-11-05 18:36:59
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4樓2012-11-07 15:18:00
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5樓2012-11-09 16:41:13
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