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charles08鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
請教一下，這是否為假陽性克隆的問題，如果是，該如何提高陽性克隆效率？
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最近一直在做克隆，用的載體是TAKARA的PMD18-T， 克隆的DNA片段1100bp左右，為普通TAQ酶（非保真）擴(kuò)增。 篩選藍(lán)白斑后挑白斑做PCR快速鑒定很久都檢測不到陽性結(jié)果（如圖），然后聽取網(wǎng)友建議將94的預(yù)變性時(shí)間改為10分鐘，僥幸得到2個(gè)弱弱的條帶，然后挑其他白斑重復(fù)均得不到有效結(jié)果。非常奇怪、原來做這種克隆一個(gè)星期以內(nèi)絕對會(huì)出結(jié)果，隨便挑斑就能出來�，F(xiàn)在怎么這么難，挑了10-20個(gè)克隆還不能出現(xiàn)陽性。 弱弱問下各位幫忙分析下可能的原因在哪里？ 如果是假陽性問題，那么怎么才能提高轉(zhuǎn)化效率？ 另外，一直不得解的是電泳圖上方泳道口的帶是什么？有人說是蛋白，但是蛋白也能被EB染色嗎？ junye pcr.JPG [ 來自科研家族 農(nóng)業(yè)科研團(tuán)隊(duì) ] |
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charles08
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3樓2012-11-07 10:19:54
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charles084樓2012-11-07 10:31:36
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5樓2012-11-07 10:53:06
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