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xiaoxia110木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于Ni sepharose填料裝柱子的相關(guān)問題
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請問有誰自己用Ni sepharose填料裝過柱子嗎？該柱子用于AKTA上的，由于原來買的預(yù)裝柱不能用了，老板又不買新柱子，故后來買了填料和空柱子，需要自己裝。 1 請問直接將填料灌到柱子里就行了嗎？ 2 有沒有什么技巧和注意事項？ 3 怎樣避免出錯？ 4 另外，有沒有對預(yù)裝柱進(jìn)行重新再生的好方法？ 柱子如下圖所示： U5IWA4]4UJS%IRH6W$R_4@J.jpg |
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2樓2012-11-14 13:11:23
yongbo_liang
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xiaoxia110: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2012-11-17 09:47:28
xiaoxia110: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝 2012-11-17 09:47:28
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⑴ 讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。 ⑵ 根據(jù)柱子大小取所需量的介質(zhì)，清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液1（若是干粉直接用緩沖液1）配成勻漿，并作脫氣處理。 ⑶ 將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液1潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。 ⑷ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使介質(zhì)在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。 ⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1-3倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。 4.平衡 用5-10倍柱體積的緩沖液1平衡柱子。 5.上樣 將離心或過濾后的樣品緩慢流過層析柱，用5-10倍柱體積緩沖液1洗去層析柱中未結(jié)合雜蛋白。 注：介質(zhì)對樣品的吸附程度取決于樣品的性質(zhì)和流動相的性質(zhì)。 6.洗脫 |
3樓2012-11-16 14:09:50
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4樓2012-11-16 16:05:51
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