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20111987

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以下是我用到的兩對(duì)引物序列，大家?guī)兔匆幌率遣皇呛苋菀仔纬梢锒垠w啊，為什么我試了各種方法，擴(kuò)增出來的都只有二聚體沒有目的條帶，但是內(nèi)參卻擴(kuò)增出來的很好，不知道什么原因呀
5′-AGCATCATGCCACCTACGTGA-3′
5′-CACCACCATTGAATTTCAGCG-3′

5′CGAGCTCGAACCTGTAATCAGCCATG 3′
5′GGGGTACCGCTGATATTCTTCCAGTTG 3′

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1樓 2012-11-09 16:21:13

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tupac225

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自己看看引物3'端末端是否有互補(bǔ)序列，這樣的話容易造成引物以引物為模板進(jìn)行延伸，行成引物二聚體。
我覺得還是你的引物設(shè)計(jì)的不好，

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coasttocoast。

2樓2012-11-09 23:21:39

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2樓: Originally posted by tupac225 at 2012-11-09 23:21:39
自己看看引物3'端末端是否有互補(bǔ)序列，這樣的話容易造成引物以引物為模板進(jìn)行延伸，行成引物二聚體。
我覺得還是你的引物設(shè)計(jì)的不好，

可是我的引物是按照文獻(xiàn)中用過的引物合成的呀，我就是不明白為什么人家論文里面能擴(kuò)增出來，而我卻做不出來呢。

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3樓2012-11-10 08:09:21

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dsm1026

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

別人文獻(xiàn)里的模板跟你的模板是一樣的嗎？還有。你的引物內(nèi)部之間可能會(huì)形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

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4樓2012-11-10 09:03:17

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4樓: Originally posted by dsm1026 at 2012-11-10 09:03:17
別人文獻(xiàn)里的模板跟你的模板是一樣的嗎？還有。你的引物內(nèi)部之間可能會(huì)形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

不是一樣的，但是處理是相同的，感覺我的模板肯定有該基因的，不知道為何擴(kuò)增不出來。

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5樓2012-11-12 08:12:41

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wcg129

禁蟲 (著名寫手)

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20111987: 金幣+1, ★有幫助 2012-11-12 14:44:40

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6樓2012-11-12 10:21:08

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6樓: Originally posted by wcg129 at 2012-11-12 10:21:08
不排除無模板的可能，在這里糾結(jié)還不如直接找一個(gè)該基因或者合成一個(gè)該基因驗(yàn)證一下？...

我剛才又考慮了一下，可能是我的模板放的時(shí)間太長(zhǎng)了，可能部分降解了，我想問一下該如何檢測(cè)我的模板是否降解呢？

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7樓2012-11-12 11:10:08

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我剛才又考慮了一下，可能是我的模板放的時(shí)間太長(zhǎng)了，可能部分降解了，我想問一下該如何檢測(cè)我的模板是否降解呢？

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8樓2012-11-12 11:10:34

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動(dòng)力泉

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20111987: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-11-12 14:44:56

將模板跑個(gè)電泳，拖尾嚴(yán)重的可能降講解

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好好學(xué)習(xí)

9樓2012-11-12 12:58:06

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9樓: Originally posted by 動(dòng)力泉 at 2012-11-12 12:58:06
將模板跑個(gè)電泳，拖尾嚴(yán)重的可能降講解

好的，謝謝！

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10樓2012-11-12 14:43:56

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