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sarah-miao銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
親們，你們的包涵體蛋白透析會(huì)出現(xiàn)沉淀么，郁悶啊，能不能給只個(gè)招？？？
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| 最近大量表達(dá)一種蛋白，蛋白表達(dá)量尚可，因?yàn)橄Ｍ軌蜃吖に嚵鞒蹋缘鞍椎募兓霈F(xiàn)問(wèn)題，表達(dá)的蛋白在包涵體中，后期純化是，8M尿素透析，然后選用PBS透析，但是蛋白總是沉淀，如何才能使得蛋白不沉淀呢，是不是只有加大尿素用量？但是到最后用PEG濃縮可以么？你們的包涵體都是怎么純化的啊，有沒(méi)有做這一方面的孩子啊，整天純化蛋白，然后總是沉，郁悶啊，郁悶啊 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 我之前也遇見(jiàn)過(guò)這種情況，后來(lái)分級(jí)透析，逐步在6M、4M、2M、1M透析2小時(shí)，然后PBS緩沖液里面透析過(guò)夜，幾乎沒(méi)有沉淀，樓主可以試試，不過(guò)可能和蛋白本身性質(zhì)關(guān)系也很大，我也做過(guò)一個(gè)蛋白怎么透析都有沉淀的，但是沉淀里有目的蛋白，緩沖液也有，并且量還不錯(cuò)，就直接棄掉沉淀了。 |
2樓2012-11-14 11:30:49
sarah-miao
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3樓2012-11-21 10:39:40
pennchem
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4樓2012-11-21 15:29:38
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5樓2012-11-21 20:07:36
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6樓2012-12-25 21:51:05
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