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longyh6411金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
隨機(jī)引物獲得的片段測(cè)序效果不好
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使用隨機(jī)引物做PCR，獲得的片段膠回收后送測(cè)序效果很不好，可能是引物與模板結(jié)合能力太差了。我想將引物5‘端縮短，做PCR的時(shí)候用原來(lái)的引物，而在測(cè)序的時(shí)候使用相應(yīng)的縮短5'端的引物來(lái)測(cè)，是否會(huì)對(duì)測(cè)序效果有幫助呢？ 或者請(qǐng)教遇到過(guò)類似問(wèn)題的前輩指教是否有別的辦法可以解決這個(gè)問(wèn)題？ 另外，將PCR產(chǎn)物克隆到載體，然后用通用引物測(cè)序這途徑不考慮，因?yàn)槲覙犹嗵M(fèi)時(shí)間 |
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zhaodahe
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
longyh6411: 金幣+50, ★有幫助 2012-11-24 15:44:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
longyh6411: 金幣+50, ★有幫助 2012-11-24 15:44:03
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建議還是做克隆，隨機(jī)引物擴(kuò)增效率不高，而且有很多雜帶，用擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序難免出問(wèn)題。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2012-11-19 08:31:07
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