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hellen1987木蟲 (小有名氣)
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[求助]
2011年5月買的亞油酸,開封了,現(xiàn)在還能用嗎?
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當(dāng)時買的亞油酸沒有充氮密封保存,就直接放在4攝氏度冰箱,一年多了,會不會被氧化了不能用了?大家誰比較有經(jīng)驗可以告訴我嗎? 我們買這個亞油酸是用作脂肪氧化酶活力測定的底物。 |
木蟲 (小有名氣)
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LOX酶活的測定 底物溶液配制:在N2保護(hù)下,取111μL亞油酸加入到10mL容量瓶中,用無水乙醇定容到10mL,得到濃度為1%(W/V)的亞油酸-無水乙醇溶液。取上述溶液3.55mL,加入40μL吐溫-20。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇,殘余固形物溶解在50mL,0.05mol/L的Na2HPO4溶液中,往其中滴加1N NaOH,調(diào)節(jié)pH值至9.0。該底物溶液中亞油酸濃度和吐溫-20的濃度分別為2.53×10-3mol/L、0.08%(w / v)。此溶液采用N2保護(hù),5℃避光保存,備用。 粗酶液配制:將上述酶提取液用冷的0.1M醋酸(鹽)緩沖液(pH4.5)稀釋20倍,作為酶測定液,5℃冷藏,備用。 紫外分光光度法分析:檢測溫度25℃,檢測波長234nm[。 反應(yīng)液:2.0 mL緩沖溶液,200μL底物溶液,50μL粗酶液; 參比液:2.0 mL緩沖溶液,200μL底物溶液,50μL鈍化處理的粗酶液。 反應(yīng)在Beckman DU800分光光度計中進(jìn)行,檢測波長234nm,分光光度計調(diào)零時,參比池和樣品池分別裝入?yún)⒈热芤,調(diào)零后,倒掉樣品池中的參比液,加入2.0 mL緩沖溶液,200μL底物溶液,立刻加入50μL酶溶液,迅速混合,樣品池放入原位,開始計時,該過程不超過10 s,光密度增量從最初的線性部分開始計算。 |
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